一种高保真单向DNA合成方法初步探索  

A high-fidelity DNA unidirection synthesis method:preliminary exploration

作　　者：吴逊[1,2] 李玉霞[1] 李北平[1] 李炳娟[1] 白东梅[1] 张昕[2] 凌焱[1] 周围[1] 刘刚[1] 陈惠鹏[1] 

机构地区：[1]军事医学科学院生物工程研究所,北京100071 [2]安徽大学生命科学学院,合肥230031

出　　处：《军事医学》2014年第7期527-531,共5页Military Medical Sciences

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81000763);国家科技重大专项资助项目(2012ZX09301003);国家973计划资助项目(2009CB52604)

摘　　要：目的建立一种高保真、简单快速的DNA片段合成方法。方法提出一种高保真DNA单向合成方法(high fidelity DNA unidirection synthesis method,HFUS),主要在Phusion DNA聚合酶、BsrDⅠ限制性内切酶和λ外切酶3种酶协同作用下,将一条正向DNA单链和数条反向DNA单链通过逐个顺序扩增的方式,最终合成出目的DNA片段。该方法采用37℃、50℃和72℃3个温度的快速转换实现片段扩增的分步有序化合成。结果通过HFUS法,初步合成出2条长度分别为340 bp、450 bp的DNA随机序列片段。结论该研究探索了一种新的合成DNA片段的方法,初步实现了长达450 bp DNA片段的快速合成,为DNA合成方法提供了新的思路。Objective To establish a simple but quick method to improve the high fidelity of the synthesis of DNA fragments.Methods High fidelity DNA unidirection synthesis method（HFUS） was presented and used that involved Phusion DNA polymerase,BsrDⅠ restriction enzymes and λ exonuclease.Using the same system at different temperatures,HFUS method synthesized one positive single-strand DNA and several reverse single-stranded DNA one by one into the target DNA fragment.Results Two random sequences DNA fragments of 340 bp and 450 bp were synthesized using HFUS method.Conclusion This article explores a new method for the synthesis of genes.Through the harvest of 450 bp DNA,HFUS may promise to be a new approach to the synthesis of DNA.

关 键 词：DNA片段合成 单向延伸 高保真DNA单向合成法 

分 类 号：Q523[生物学—生物化学]