白芨ISSR-PCR反应体系的建立及优化  

Establishment and Optimization of ISSR Reaction System for Bletilla striata

作　　者：刘亭[1] 金露[1] 兰波[1] 何彬[2] 李靖[2] 王永林[1] 

机构地区：[1]贵阳医学院药学院贵州省药物制剂重点实验室,贵州贵阳550004 [2]贵阳医学院民族药与中药开发应用教育部工程研究中心,贵州贵阳550004

出　　处：《贵阳医学院学报》2014年第4期455-458,462,共5页Journal of Guiyang Medical College

基　　金：国家自然科学基金(NO.81360636);贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目[黔科合重G字(2013)4001;黔科合中药字(2013)5062号];贵阳市科学技术计划项目[筑科合同(2012204)20号]

摘　　要：目的:建立并优化白芨ISSR-PCR反应体系,为白芨种质资源分子评价奠定技术基础。方法:应用单因素和正交试验研究ISSR-PCR反应体系中模板DNA、Mg2+、引物、dNTP、BSA及Taq DNA聚合酶等6个主要成分对扩增结果的影响,优化出ISSR-PCR最佳反应体系。结果:优化后25μL反应体系中含100 ng DNA模板、2.0 mmol/L Mg2+、2.5μmol/L引物、0.2 mmol/L dNTP浓度、3.75 g/L BSA及1.25 U Taq DNA聚合酶。结论:建立了适用于白芨的ISSR-PCR最佳反应体系。Objective： To establish an optimal ISSR-PCR reaction system for BletiUa striata and pro- vide foundation for its germplasm resources evaluation. Methods： By using single factor method and orthogonal design, adopting the six critical factors＇（DNA template, Mg^2＋ , primers, dNTP, BSA and Taq DNA polymerase） influence on amplification results to optimize the best ISSR-PCR reaction sys- tem. Results： 25 μL of the optimal reaction solution contained 100 ng DNA template, 2.0 mmol/L Mg^2＋ , 2.5 μmol/L primers, 0.2 mmol/L dNTP, 3.75 g/L BSA and 1.25 U Taq DNA polymerase. Conclusions： The best ISSR-PCR reaction system which is suitable for Bletilla striata is established.

关 键 词：白芨 简单序列重复区间扩增多态性技术 聚合酶链反应 体系优化 单因素试验 正交试验 

分 类 号：R931.5[医药卫生—生药学] R34-33[医药卫生—药学]