重组人源SNX7蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及磷脂结合特异性分析  

Expression, purification and phosphoinositide binding specifity of recombinant human SNX7 expressed in Escherichia coli

作　　者：冯站 许婷婷[2] 徐进新 

机构地区：[1]安徽大学生命科学学院,安徽合肥230601 [2]中国科学院广州生物医药与健康研究院,广东广州510530

出　　处：《生物工程学报》2014年第9期1436-1445,共10页Chinese Journal of Biotechnology

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973计划)(No.2012CB917200)资助~~

摘　　要：Sorting nexins(SNXs)是一类含有SNX-PX结构域,并在细胞内吞和内体分选运输过程中发挥重要调节作用的蛋白。SNX7是SNXs家族中的一员,含有PX结构域和BAR结构域,属于SNX-PX-BAR亚家族。斑马鱼实验表明,SNX7是在肝脏中大量表达的抗凋亡蛋白,并在胚胎肝脏的发育中发挥关键作用。为了从蛋白水平对SNX7进行研究,首先将编码人源PX-BARSNX7(SNX7的一个片段,包含PX和BAR结构域)的cDNA片段插入到原核表达载体p28a中,再将重组质粒转化到大肠杆菌Rosseta 2(DE3)中诱导表达,并用亲和层析、离子交换和分子筛层析对PX-BARSNX7进行了纯化。Western blotting结果表明,亲和层析、离子交换和分子筛层析纯化后获得了高纯度的PX-BARSNX7蛋白。动态光散射实验显示PX-BARSNX7蛋白均一性良好。磷脂结合实验表明,PX-BARSNX7具有较为广泛的磷脂酰肌醇结合能力,能够与PtdIns(5)P、PtdIns(4,5)P2和PtdIns(3,4,5)P3结合。Sorting nexins （SNXs） are a large group of proteins that contain Phox （PX） domain and involve in regulating endocytosis and endosome sorting. SNX7, a member of SNXs family, contains a PX domain and a BAR domain. In zebrafish, SNX7 is a liver-enriched anti-apoptotic protein and indispensible for the liver development. A fragment of SNX7 cDNA （px＇barsnx7）, encoding the PX domain and the BAR domain, was inserted into the expressing vector p28a, transformed into E. coli Rosseta 2 （DE3）, and then induced by isopropyl 13-D-1-Thiogalactopyranoside （IPTG）. After affinity, ion exchange and gel filtration purification, the purity of Px-anRSNX7 reached over 95%. Dynamic light scattering （DLS） experiment indicated that ex-BnRSNX7 was homogeneous in solution. Lipid overlay assay showed that eX-BAnsNX7 can bind to Ptdlns（5）P, Ptdlns（4,5）P2 and Ptdlns（3,4,5）P3.

关 键 词：SORTING nexin 7(SNX7) 磷脂结合 均一性 表达纯化 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]