鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立和应用  

作　　者：余斌[1] 华炯钢[1] 刘跃生[2] 赵灵燕[3] 倪征[1] 叶伟成[1] 云涛[1] 陈柳[1] 徐辉[3] 张存[1] 

机构地区：[1]浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州310021 [2]嘉兴职业技术学院 [3]浙江省动物疫病预防控制中心

出　　处：《浙江畜牧兽医》2014年第5期1-6,共6页Zhejiang Journal Animal Science and Veterinary Medicine

基　　金：浙江省重点科技创新团队(2010R50027);浙江省科技计划项目(2011C14011);浙江省"三农六方"项目;嘉兴市科技研究计划项目(2012AY1063)

摘　　要：为建立特异性和敏感性较高的鸭坦布苏病毒（DTMUV）抗体检测方法,采用原核表达系统对DTMUV E蛋白的DⅢ结构域进行了双串联融合表达,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白大小约25 Ku.Western blot结果显示,经亲和层析纯化的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应.以纯化的重组DⅢ蛋白作为包被抗原,初步建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法.采用梯度稀释法对ELISA各种反应条件进行优化,确定最适工作条件.重组抗原最适包被浓度为5 μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,兔抗鸭酶标抗体最适稀释度为1∶1000;抗体临界值S/P≥0.336判定为阳性,S/P≤0.287判定为阴性,介于两者之间为可疑.该方法检测禽流感病毒、鸭源新城疫、鸭甲肝病毒、鸭圆环病毒、鸭细小病毒、经典呼肠孤病毒及新型鸭呼肠孤病毒等血清均为阴性,4个批次批内与批间重复试验的OD值变异系数分别为6.21％～7.27％和3.4％ ～7.2％,显示该法具有很好的特异性、稳定性和重复性.用建立的间接ELISA与中和试验分别对108份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,两种方法的阳性符合率为83.3％.

关 键 词：鸭坦布苏病毒 DⅢ结构域 串联表达 间接酶联免疫吸附试验 

分 类 号：S858.32[农业科学—临床兽医学]