苏云金芽孢杆菌原生质体的制备及大质粒转化  

作　　者：韩光杰[1] 孙俊[1] 李传明[1] 刘琴[1] 徐健[1] 

机构地区：[1]江苏里下河地区农业科学研究所,江苏扬州225007

出　　处：《江苏农业科学》2014年第11期37-40,共4页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：公益性行业(农业)科研专项(编号:201103021);国家自然科学基金(编号:301071740);江苏省农业科技自主创新资金[编号:CX(13)5069];江苏省农业科技支撑计划(编号:BE2011358);江苏扬州市农业科技攻关(编号:2012095)

摘　　要：研究苏云金芽孢杆菌原生质体制备与再生的最佳条件,为进一步提高原生质体转化率打下基础。通过酶解法对苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种工业生产菌株(Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki)2671原生质体的制备及再生条件进行了研究,考察了菌体生长状态、溶菌酶浓度、处理时间等影响因素,采用PEG法对大质粒进行原生质转化。结果表明,对数生长前期的菌体(培养3 h),以SMML作渗透压稳定剂,溶菌酶浓度7 mg/m L,40℃下酶解40 min,原生质体生成量可达5.7×107个/m L,再生率可达14.1%。在此条件下,采用PEG法可将大质粒p LTV1-ep成功转化宿主菌,转化率为0.3 CFU/μg。

关 键 词：苏云金芽孢杆菌 原生质体 制备 转化 

分 类 号：S482.39[农业科学—农药学]