肠出血性大肠杆菌O157∶H7toxB基因的分片段克隆和表达  

Cloning and expression of toxB gene in segments from enterohemorrhagic Escherichia coli O157 ∶ H7

作　　者：张雪寒[1] 栾晓婷[1] 何孔旺[1] 倪艳秀[1] 周俊明[1] 

机构地区：[1]江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014

出　　处：《江苏农业学报》2014年第6期1392-1395,共4页Jiangsu Journal of Agricultural Sciences

基　　金：江苏省农业支撑计划-社会发展项目(BE2011771);国家自然科学基金项目(31201919)

摘　　要：根据Gen Bank已有tox B基因全长序列,分别设计6对引物扩增tox B基因,克隆到质粒p GEX-4T-1,构建重组菌BL21(plys)(p GEX-4T-1-tox B),IPTG诱导表达重组蛋白质,用Western blot鉴定重组蛋白质免疫原性。tox B基因片段大小分别为1 531 bp、1 590 bp、1 609 bp、1 603 bp、1 525 bp和1 690 bp,重组蛋白质分子量分别为8.1×104、8.3×104、8.4×104、8.3×104、8.0×104和8.7×104。以兔源EHEC O157∶H7抗血清为一抗,Western blot分析结果显示6个重组蛋白质均具有良好的免疫原性。Based on the tox B sequence on Gen Bank,six primers were designed to amplify the tox B gene.The PCR fragments and p GEX-4T-1 vector were digested with EcoRⅠ and XhoⅠ,ligated with T4 DNA ligase and transformed into the complement BL21（plys） to construct recombinant BL21（plys）（p GEX-4T-1-tox B）.After induced by IPTG,recombinant Tox B proteins were expressed.SDS-PAGE analysis revealed that the molecular mass of six recombinant Tox B proteins were8.1×10^4,8.3×10^4,8.4×10^4,8.3×10^4,8.0×10^4and 8.7×10^4,respectively.Western blotting assay using rabbit sera against EHEC O157 ∶ H7 as primary antibody indicated that all six recombinant proteins had good immunogenicities.

关 键 词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 tox B基因 表达 免疫原性 

分 类 号：S852.612[农业科学—基础兽医学]