含PTD结构域的MAGE-A3融合蛋白表达、纯化及生物学功能的初步研究  

作　　者：王晓盈[1] 吴林青 陈杏婷 张文敏[1] 黄爱民 章涛 

机构地区：[1]福建省肿瘤医院,350014 [2]福建省医科大学免疫系,350108

出　　处：《医学美学美容（中旬刊）》2014年第12期6-7,共2页

摘　　要：【目的】构建、表达并纯化含有蛋白转导结构域TAT的黑色素瘤相关基闲MAGE—A3融合蛋白TAT—MAGE—A3-EGFP，并观察其生物学功能，【方法】1）构建质粒pET28a—TAT—MAGE—A3-EGFP、对照组pET28a—MAGE—A3-EGFP和pET28a—TAT—EGFP原核表达载体，在大肠埃希菌BL21（DE3）中表达，经SDS—PAGE电泳和Western Blot鉴定并通过Nj＋柱纯化获得TAT—MAGE—A3-EGFP、MAGE—A3-EGFP、TAT—EGFP三种融合蛋白；2）动态荧光显徽镜观察MAGE—A3、TAT—MAGE—A3-EGFP、TAT—EGFP三种融合蛋白在细胞中的不同分布，流式细胞术观察三种融合蛋白穿膜效率的差异。【结果】1）成功构建了pET28a—TAT—MAGE—A3-EGFP、pET28a—MAGE—A3-EGFP和pET28a—TAT—EGFP原棱表达载体，并获得了TAT—MAGE—A3-EGFP、MAGE—A3-EGFP和TAT—EGFP融合蛋白。2）动态荧光显微镜和流武细胞术显示TAT—MAGE—A3-EGFP与MAGE—A3-EGFP相比能更高效地穿过细胞膜进入细胞内，并定位于细胞质和细胞核，且与TAT—EGFP相比穿膜效率区别不大。【结论】TAT—MAGE—A3-EGFP融合蛋白可在愿核表达系统中高效表达，并具有高效穿透细胞膜能力，且带有PTD结构的融合蛋白穿膜能力与分子量无直接关系。

关 键 词：蛋白质转导结构域 树突状细胞 MAGE—A3基因 肿瘤疫苗 

分 类 号：R722.12[医药卫生—儿科]