鹿结核病流行株与卡介苗差异基因原核表达质粒的构建及表达  

Construction and Prokaryotic Expression of Discrepant Genes of Deer Tuberculosis Epidemic Strains and BCG

作　　者：王文玉[1] 曾范利[2] 时坤[2] 李健明[2] 刘红娜[1] 杜锐[3] 

机构地区：[1]吉林农业大学动物科学技术学院,长春130118 [2]吉林农业大学中药材学院,长春130118 [3]教育部动物生产及产品质量安全重点实验室吉林省药用动物二级实验室,长春130118

出　　处：《吉林农业大学学报》2014年第6期707-712,共6页Journal of Jilin Agricultural University

基　　金：国家科技支撑计划项目(2011BAI03B02-1);国家自然科学基金项目(31072140);吉林省科技发展计划项目(20120225,20125067)

摘　　要：以吉林农业大学经济动物疾病实验室保存的鹿体内分离并鉴定的结核病流行株的基因组为模板,应用PCR方法从已构建的鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因文库中扩增RD1区的Rv3872、Rv3873、Rv3874、Rv3875和Rv3878 5段目的基因,分别与p MD18-T Simple Vector连接,经PCR、酶切鉴定后的阳性重组克隆质粒与原核表达载体p GEX-4T-1连接并进行原核表达,采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法对目的蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物的反应原性进行初步研究。基因测序结果显示差异基因与期望的序列一致,并在大肠杆菌中成功诱导表达,获得以可溶形式表达的目的蛋白,经SDS-PAGE分析目的蛋白的相对分子量与理论值相符,经Western blot鉴定纯化好的目的蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应,具有良好的反应原性,为其在鹿结核病血清诊断学中的应用奠定了试验基础。correctly as expected. Subsequently, the target proteins were purified and identified by Western blot. The results showed that the purified proteins could interact with the positive serum of deer tuberculosis with excellent antigenicity. The study will be a foundation for applying these proteins in serological diagnosis of deer tuberculosis in the future.

关 键 词：鹿 结核病 差异基因 原核表达 反应原性 

分 类 号：S852.618[农业科学—基础兽医学]