细胞色素P450CYP3A65斑马鱼模型建立及对环境污染物的生物响应  

Generation of cytochrome P-450 CYP3A65 labeled fluorescence transgenic zebrafish and its biological response to environmental pollutants

作　　者：李春杰[1,2] 赵建[2] 张世勇[3] 潘微彤[2] 蒲韵竹[2] 贾启燕[2] 查晓丹 尚艳楠 黄春倩[2] 刘艳琴[2] 钟玉绪[2] 李前[2] 丁日高[2] 付爱玲[1] 赵宝全[2] 

机构地区：[1]西南大学药学院,重庆400715 [2]军事医学科学院毒物药物研究所毒理学与抗毒药物研究国家重点实验室,北京100850 [3]内蒙古通辽市科尔沁区第一人民医院骨一科,内蒙古通辽028000

出　　处：《中国药理学与毒理学杂志》2014年第6期870-877,共8页Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology

基　　金：全军医学科技"十二五"科研项目重点课题(BWS11R021);国家科技重大专项(2013ZX09402103)~~

摘　　要：目的：建立细胞色素P450CYP3A65荧光标记转基因斑马鱼用于快速、直观检测重金属（铜、镉、锌）及类二噁英化合物五氯联苯（ PCB126）等环境污染物。方法 PCR方法钓取斑马鱼CYP3A65基因调控序列，构建于pT2AL200R150G转座载体克隆位点，将pTol2-CYP3A65-EGFP 质粒与pCS-TP 转座酶mRNA共同注射入斑马鱼胚胎单细胞，通过荧光筛选，遗传选育和建立荧光标记转基因斑马鱼品系 Tg （ CYP3A65-EGFP）；利用该转基因斑马鱼胚胎及幼鱼检测上述3种重金属及 PCB126的生物学响应。结果成功建立了CYP3A65荧光标记转基因斑马鱼品系，绿色荧光在肝和消化道表达；该转基因斑马鱼对3种重金属及PCB126产生生物学响应。染毒96 h后，铜0.1和0.2μmol·L^－1、镉0.35和0.7μmol·L^－1组、锌1.5和3μmol·L^－1组、PCB126所有浓度组荧光相对表达量显著增强（ P＜0.01）；铜0.9μmol·L^－1组、镉2.7和5.4μmol·L^－1组及锌24μmol·L^－1组荧光相对表达量显著减弱（ P＜0.01）；染毒168 h 后，铜0.1和0.2μmol·L^－1组、镉0.35和0.7μmol·L^－1组、锌1.5和3μmol·L^－1组及PCB1262～32μmol·L^－1浓度组荧光相对表达量显著增强（ P＜0.01），铜0.9μmol·L^－1组、镉2.7和5.4μmol·L^－1组、锌12和24μmol·L^－1组荧光相对表达量减弱（ P＜0.05），随着浓度增加荧光减弱，呈现出量效关系。结论 CYP3A65荧光标记转基因斑马鱼模型可以用来检测铜、镉、锌及PCB126等环境污染物。OBJECTlVE To establish Tg（-6.3CYP3A65∶EGFP） transgenic zebrafish for quick, intuitive detection of heavy metals （ copper, cadmium and zinc） , dioxin-like PCBs （ PCB126） and other environmental pollutants. METHODS Tol2 transposon system was used to generate transgenic zebrafish lines Tg（-6.3CYP3A65∶EGFP） in which CYP3A65 promoter regualated labeled fluorescence. The effect of heavy mentals （ copper, cadmium and zinc ） and PCB126 on the relative amounts of CYP3A65 gene expression was determined by observing the change in fluorescence intensity. RESULTS The relative gene expression of CYP3A65 was significantly increased after 96 h exposure to copper 0.1 and 0.2μmol·L^-1 , cadmium 0.35 and 0.7μmol·L^-1 , zinc 1.5 and 3μmol·L^-1 , and PCB126 2-32μmol·L^-1 , respectively （ P〈0.01） , but decreased after 96 h exposure to copper 0. 9 μmol·L-1 , cadmium 2. 7 and 5.4 μmol·L-1 , and zinc 24μmol·L-1 , respectively（ P〈0.01） . CYP3A65 gene expression was significantly increased after 168 h exposure to copper 0.1 and 0.2 μmol·L^-1 , cadmium 0.35 and 0.7 μmol·L^-1 , zinc 1.5 and 3 μmol·L^-1, and PCB126 2-32 μmol·L^-1, respectively（P〈0.01）, but decreased after 168 h exposure to copper 0.9 μmol·L^-1, cadmium 2.7 and 5.4 μmol·L^-1, and zinc 12 and 24 μmol·L-1（ P〈0.05） , in a concentration-dependent manner. CONCLUSlON The results suggest that zebrafish CYP3A65 gene expression and the CYP3A65 labeled fluorescence lines can be another candidate biomarker for detecting environmental pollutants.

关 键 词：细胞色素P450 CYP3A65 斑马鱼 转基因 铜 镉 锌 多氯联苯化合物 

分 类 号：R965[医药卫生—药理学]