2种诱导iPSC向神经干细胞分化方法的比较  

Comparison of 2 methods for inducing iPSC to differentiate into neural stem cells

作　　者：杨坦[1,2] 刘华[2,3] 汪运山[2,3] 

机构地区：[1]山东省医学科学院基础医学研究所,济南大学-山东省医学科学院医学与生命科学学院 [2]山东大学附属济南市中心医院中心实验室 [3]山东省移植与组织工程研究中心,山东济南250013

出　　处：《中国病理生理杂志》2015年第1期188-192,共5页Chinese Journal of Pathophysiology

基　　金：973计划资助项目(No.2012CB966503;No.2012CB966504);国家青年科学基金资助项目(No.81200950)

摘　　要：目的:整体比较2种促进诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSC)向神经干细胞(neural stem cells,NSC)分化的方法,确定一种稳定、高效的获得NSC的方法,并对NSC进行系统鉴定。方法:方法A:SB431542和drosomophorin的浓度均为5μmmol/L,诱导初始密度100%;方法 B:SB431542的浓度为5 mmol/L,drosomophorin的浓度为1 mmol/L,诱导初始密度为40%。比较及鉴定方法:镜下观察诱导获得NSC的状态;realtime PCR比较神经干细胞相关基因Pax6、nestin、Sox1、Sox2等表达量;流式细胞术分析诱导第16天Pax6阳性率;免疫荧光定性分析神经干细胞相关蛋白的表达及其自发分化的能力。结果:方法 A获得的NSC悬起后成球趋势明显,圆形,透明;方法 B诱导获得NSC形状不规则,色灰暗。Real-time PCR结果证明方法 A诱导获得的细胞神经干细胞相关基因的表达量高于方法 B。流式细胞术分析证明第16天,PAX6的阳性率,方法 A高于方法 B。经鉴定,方法 A获得的神经干细胞高表达Pax6、nestin、Sox2等基因自发分化30 d,形成明显的神经纤维束,表达TUJ-1、MAP2及GFAP等神经元和胶质细胞的特异性标志物。结论:方法 A整体优于方法 B,我们推荐方法 A作为诱导i PSC向神经干细胞分化的方法。AIM：To select an efficient way of promoting induced pluripotent stem cells （ iPSC） to differentiate into neural stem cells （NSC） by comparing 2 methods.METHODS：The culture system in method A contained SB431542 （5 mmol/L） and drosomophorin （5 mmol/L） with 100%initial cell density, while that in method B contained SB431542 （5 mmol/L） and drosomophorin （1 mmol/L） with 30%～50% initial cell density.For comparison and identification of the 2 methods, the growth state was observed under microscope , and the expression of Pax6, nestin, Sox1 and Sox2 was quantitatively detected by real-time PCR and flow cytometry .The related protein expression and the ability of spontaneous differentiation were determined by immunofluorescence analysis .RESULTS： The cells derived from method A with 5 mmol/L of SB431542 and drosomophorin and 100% initial cell density achieved the higher expression of Pax 6, nestin, Sox1 and Sox2.The growth state was better and the cells differentiated into neurons and astrocytes normally .CONCLU-SION：The method A was superior to method B , and we recommend the method A with 5 mmol/L of SB431542 and droso-mophorin and 100%initial cell density as the method for differentiating NSC .

关 键 词：诱导性多能干细胞 分化 神经干细胞 

分 类 号：R33-3[医药卫生—人体生理学]