茭草ISSR-PCR体系的优化  

Optimization of ISSR-PCR System of Zizania latifolia

作　　者：仇玉萍[1] 吕玉凤[1] 

机构地区：[1]国家高原湿地研究中心/西南林业大学,昆明650224

出　　处：《中国农学通报》2015年第6期136-141,共6页Chinese Agricultural Science Bulletin

基　　金：国家科技部"973"计划前期研究专项"筑坝扩容下滇西北典型湿地湖滨带植被演替机制"(2012CB426509);西南林业大学科研启动基金项目"水稻WRKY45基因的功能研究"(111041)

摘　　要：为了建立适用于茭草的ISSR-PCR反应体系,以湿地植物茭草基因组DNA为研究对象,筛选引物为UBC818,采用正交试验设计方法,建立了茭草ISSR-PCR反应体系和扩增程序。结果表明,在25μL反应体系中含有1×PCR缓冲液、250μmol/L d NTP、2.0 mmol/L Mg Cl2、0.5μmol/L引物、1.0 U Taq DNA聚合酶和100 ng模板DNA最适用于茭草ISSR-PCR扩增。适宜的扩增程序为94℃5 min;94℃1 min;56℃45 s;72℃90 s;35个循环;72℃10 min;4℃保存。In order to establish a suitable ISSR-PCR reaction system for Zizania latifolia,the wetlands plant Zizania latifolia genomic DNA was optimized with choosing the primer UBC818.We used the orthogonaldesign to establish an ISSR-PCR reaction system and amplification program.The results indicated that 25 μLreaction system containing 1×PCR buffer,250 μmol/L d NTP,2.0 mmol/L Mg Cl2,0.5 μmol/L primer,1 U Taq DNA polymerase and 100 ng template DNA was suitable to ISSR-PCR amplifying.Amplification program asfollowed：pre-denaturation at 94℃ for 5 min,denaturrtion at 94℃ for 1 min,annealing at 56℃ for 45 s,extending at 72℃ for 90 s,after 35 cycles,then extending again at 72℃ for 10 min and keeping at 4℃.

关 键 词：茭草 ISSR 正交设计 反应体系 

分 类 号：Q949[生物学—植物学]