埃博拉病毒NP抗原表位区段的克隆和表达  

The cloning and expression of nucleoproteins(NP) of Ebola virus

作　　者：王晓丹[1] 李鹏飞[1] 冯晓燕[1] 朱翠侠[1] 阙海萍[1] 张旭辉[1] 刘志强[1] 段翠密[1] 修冰水[1] 张贺秋[1] 

机构地区：[1]军事医学科学院基础医学研究所,北京100850

出　　处：《军事医学》2014年第9期659-662,共4页Military Medical Sciences

基　　金：国家科技重大专项资助项目(2013ZX10004-803);国家科技重大专项资助项目(2011ZX10004-001)

摘　　要：目的分析埃博拉病毒核蛋白（NP）抗原表位,克隆表达埃博拉病毒NP抗原,为免疫学诊断试剂的研究奠定基础。方法采用BioSun生物学软件预测分析埃博拉病毒NP抗原的氨基酸表位区间,采用大肠杆菌优势密码子反向翻译成基因序列,采用PCR退火合成法合成NP优势密码子抗原基因,并利用载体pBVIL1进行克隆表达。采用间接ELISA技术评价获得NP抗原的特异性。结果确定埃博拉病毒NP抗原的氨基酸表位位于360~739 aa,共设计36条引物,扩增合成1140 bp的NP抗原基因,克隆表达后,融合蛋白相对分子质量为58×10^3,测序结果显示插入的NP基因正确。初步结果显示,NP抗原的特异性为99.24%（130/131）。结论获得埃博拉病毒NP抗原,为进一步研制特异的埃博拉病毒快速诊断试剂提供了抗原储备。Objective To provide the candidate antigens for immunological diagnosis by analyzing the expression of nucleoprotein（ NP） of Ebola virus. Methods BioSun software was used to predict the NP epitopes. The bridging-PCR was used to synthesize the NP gene. The pBVIL1 vector was used to clone and express the NP gene. Results The 360- 739 aa of NP was confirmed to be the dominant antigen by BioSun software. The recombinant NP dominant antigen was expressed in E. coli with molecular weight of 58 × 10^3. The specificity of ELISA based on recombinant NP was 99. 24%（ 130 /131）in negative samples. Conclusions The dominant NP antigen can be potentially used for developing Ebola virus diagnostic reagent.

关 键 词：埃博拉病毒 核蛋白 抗原表位区段 表达 

分 类 号：R373[医药卫生—病原生物学]