猪轮状病毒VP7蛋白模拟表位的噬菌体展示技术筛选与鉴定  

Identification and characterization of porcine rotavirus VP7 protein mimotope by phage screening technique

作　　者：任晓峰[1] 秦昭恒 曹丽艳[1] 葛旭颖 

机构地区：[1]东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030

出　　处：《东北农业大学学报》2015年第2期11-17,共7页Journal of Northeast Agricultural University

基　　金：国家自然科学基金项目(31300758;31340003);"十二五"国家科技支撑项目(2013BAD12B04);哈尔滨科学技术局项目(RC2012XK002003);教育部重点项目(212038)

摘　　要：猪轮状病毒（Po RV）是引起仔猪腹泻的重要病原之一,其主要结构蛋白衣壳蛋白VP7可诱导机体产生中和抗体。文章以制备的抗Po RV VP7单克隆抗体（MAb）3B6作为靶分子,利用噬菌体十二肽库展示技术对其模拟表位进行筛选。四轮筛选后随机挑取阳性克隆扩增后进行ELISA鉴定,同时提取其基因组DNA测序,10个阳性噬菌体亲和肽拥有共同的外源肽序列＂VPLGTDNGDIWV＂,而且与靶分子有很高亲和力。阳性噬菌体亲和肽与VP7蛋白进行序列比对,结果表明,十二肽中有4个氨基酸（第167位P、第178位T、第179位D和第184位W）与VP7蛋白167-184位氨基酸有一定的相似性。竞争抑制ELISA证明亲和多肽降低Po RV与抗VP7单克隆抗体之间的作用,病毒竞争抑制试验表明亲和多肽可以竞争性地抑制Po RV感染细胞。因此由这4个氨基酸构成的基序很有可能作为猪轮状病毒VP7蛋白的一个模拟表位。Porcine rotavirus（Po RV） causes diarrhea, vomit, dehydration, acid- base imbalance and death in piglets. Po RV VP7 is the outer capsid glycoprotein that is highly immunogenic and induce the production of neutralizing antibody. A prepared monoclonal antibody（MAb） 3B6 against Po RV VP7 protein was used as immobilized target in a subtract biopanning process using a 12-mer phage display random peptide library. After four rounds of pannings, 10 phages bearing the consensus peptide VPLGTDNGDIWV and having a specific binding activity to the target were identified. Sequence alignment between positive phage-displayed 12-mer peptide and VP7 protein suggested that a potential motif that is identical with 167（P）, 178（T）, 179（D） or 184（W） aa in the VP7 protein. Competition ELISA showed that the high affinity peptide reduced the combination of Po RV with anti- VP7 MAb. Moreover,this peptide could significantly inhibit Po RV propagation in cell culture. In conclusion, the 4 amino acid motif（P-TD-W） functions as a spatial conformation epitope of Po RV VP7 protein.

关 键 词：猪轮状病毒 VP7蛋白 噬菌体筛选 模拟表位 

分 类 号：S828[农业科学—畜牧学] S851[农业科学—畜牧兽医]