外源性一氧化碳对脓毒症时肝、肺组织中性粒细胞过度浸润的抑制作用及其机制  

Effect and mechanism of exogenous carbon monoxide against excessive neutrophil infiltration in liver and lung tissues during sepsis

作　　者：王旭[1] 宋明明[1] 沈唯长 秦魏婷 吕汪洄 孙炳伟[1] 

机构地区：[1]江苏大学附属医院烧伤整形科,镇江212001

出　　处：《中华创伤杂志》2015年第3期201-206,共6页Chinese Journal of Trauma

基　　金：国家自然科学基金资助项目（81071546,81272148,81471903）;江苏省自然科学基金资助项目（BK2012703）

摘　　要：目的 探讨外源性一氧化碳对脓毒症时肝、肺组织中性粒细胞过度浸润的抑制作用及其机制.方法 （1） 32只雄性小鼠按随机数字表法分为假手术组、盲肠结扎穿孔组（CLP组）、CLP＋外源性一氧化碳释放分子2（CORM-2）（8 mg/kg）干预组（CORM-2干预组）、CLP＋无活性CORM-2（iCORM-2）（8 mg/kg）干预组（iCORM-2干预组）,每组8只.术后24 h分别取肝、肺组织,检测病理改变、髓过氧化物酶（MPO）活性及丙二醛（MDA）含量.（2）另取60只小鼠分组同（1）,每组15只;术后连续观察72 h,进行存活率分析.（3）分离小鼠骨髓中性粒细胞,分为正常对照组、脂多糖（LPS,1μg/ml,浓度下同）刺激组（LPS组）、LPS＋低浓度CORM-2（10 μmol/L）刺激组（低浓度组）、LPS＋高浓度CORM-2（50 μmol/L）刺激组（高浓度组）、LPS＋iCORM-2（50 μmol/L）刺激组（iCORM-2组）,1h后进行琼脂糖凝胶平板趋化实验,定量PCR、免疫荧光检测趋化因子甲酰肽受体1（FPR1）含量.结果 与假手术组比较,CLP组MPO活性明显增强[肝（9.1±1.1）U/g、肺（16.3±2.8）U/g] （P ＜0.05）,MDA含量明显上升[肝（76.5±11.3） nmol/mg、肺（32.4 ±10.3） nmol/mg] （P ＜0.05）,72 h存活率仅为20％（P＜0.05）;CORM-2干预组能显著抑制MPO活性[肝（5.2±0.8）U/g、肺（7.5±2.4）U/g]（P＜0.05）及MDA含量的增高[肝（46.7 ±6.1）nmol/mg、肺（23.8 ±7.3） nmol/mg] （P ＜0.05）,72 h存活率为67％ （P ＜0.05）.与正常对照组比较,LPS组中性粒细胞[（61.3±7.1）个]趋化能力增强（P＜0.05）,FPR1表达增多且富集于细胞膜;低浓度组、高浓度组可有效抑制上述变化,且呈剂量依赖性[低浓度组（43.3±6.1）个、高浓度组（23.3±5.9）个]（P＜0.05）.结论 外源性一氧化碳通过下调脓毒症时FPR1表达、减少细胞膜FPR1含量及有效抑制脓毒症时中性粒细胞趋化能力抑制肝、肺组织中性粒细胞过度浸润,减�Objective To determine the inhibitory effect and mechanism of exogenous carbon monoxide against excessive neutrophil infiltration in liver and lung tissues during sepsis.Methods Thirty-two mice were subjected to sham operation （sham group）,cecal ligation and perforation （CLP） group,CLP with 8 mg/kg of exogenous carbon monoxide releasing molecule Ⅱ （CORM-2） （CORM-2 group）,and CLP with 8 mg/kg of inactive variants of CORM-2 （iCORM-2） （iCORM-2 group） according to the random number table,with 8 mice per group.Liver and lung tissues were collected at 24 hours after surgery to examine the pathologic changes,myeloperoxidase （MPO） activity and malonaldehyde （MDA） content.Another 60 mice were enrolled into the same 4 groups with 15 mice per group and were tested for 72-hour survival rate.Bone marrow neutrophils were isolated and divided into normal control group,1 μg/ml lipopolysaccharide （LPS） group,1 μg/ml LPS plus 10 μmol/L CORM-2 group （low dose group）,1 μg/ml LPS plus 50 μmol/L CORM-2 group （high dose group）,1 μg/ml LPS plus 50 μmol/L iCORM-2 group （iCORM-2 group）.Under the agarose chemotaxis,qPCR and immunofluorescence detection of formyl peptide receptor 1 （FPR1） were performed.Results CLP group presented enhanced activity of MPO [liver：（9.1 ± 1.1） U/g,lung：（16.3 ± 2.8） U/g],increased MDA content [liver：（76.5 ±11.3） nmol/mg,lung：（32.4 ± 10.3） nmol/mg] and 72-hour survival rate of 20% as compared with the sham group （all P 〈 0.05）.CORM-2 group showed inhibited activity of MPO [liver：（5.2 ± 0.8） U/g,lung：（7.5 ± 2.4） U/g],increased MDA content [liver：（46.7 ± 6.1） nmol/mg,lung：（23.8 ±7.3） nmol/mg] and 72-hour survival rate of 67% as compared with the sham group （all P 〈 0.05）.LPS enhanced neutrophil migration （61.3 ± 7.1） （P 〈 0.05） and expression of FPR1 which was enriched in the membrane.Meanwhile,neutrophil migration was significantly inhibited in a dose-dependent of CORM-2 （l

关 键 词：脓毒症 中性白细胞浸润 一氧化碳 趋化 

分 类 号：R459.7[医药卫生—急诊医学]