瘢痕疙瘩及其成纤维细胞p16基因甲基化状态和相关基因表达研究  

Methylation status of p16 gene and expressions of related genes in keloid tissue and cultured keloid fibroblasts

作　　者：季江[1] 冷红[1] 冀胜军[2] 苏玉华[1] 施辛[1] 田野[2] 曹建平[3] 

机构地区：[1]苏州大学附属第二医院皮肤科,215004 [2]苏州大学附属第二医院肿瘤放疗科,215004 [3] 苏州大学医学部放射医学与公共卫生学院

出　　处：《中华皮肤科杂志》2015年第3期171-174,共4页Chinese Journal of Dermatology

基　　金：国家自然科学基金（81172128、81402517）;江苏省放射医学与防护重点实验室开放课题（KJS1244）;江苏省临床医学科技专项（BL2014040）

摘　　要：目的 探讨瘢痕疙瘩中成纤维细胞p16基因甲基化在其发生发展中的作用.方法 分离、培养来自瘢痕疙瘩皮损和健康人皮肤原代成纤维细胞;免疫组化法检测瘢痕疙瘩皮损中p16表达情况;实时荧光定量PCR检测瘢痕疙瘩成纤维细胞中p16、DNA甲基转移酶mRNA表达;亚硫酸氢盐修饰后测序（BSP法）检测瘢痕疙瘩皮损及培养的原代成纤维细胞p16基因甲基化状态.结果 瘢痕疙瘩成纤维细胞中p16基因mRNA表达低于健康人皮肤成纤维细胞（相对表达量2-△△Ct分别为0.64±0.18和1.92±0.23,t=10.54,P＜0.05）.瘢痕疙瘩成纤维细胞三种DNA甲基转移酶（DNMT）基因mRNA表达水平（DNMT1、DNMT3A、DNMT3B分别为2.58±0.23、4.87±0.46、1.57±0.12）与健康人皮肤成纤维细胞（分别为1.13±0.21、2.38±0.32、0.57±0.16）相比均存在高表达,两组比较,t值分别为11.22、10.81、12.45,均P＜0.05.瘢痕疙瘩组织和瘢痕疙瘩原代成纤维细胞内p16启动子区甲基化程度分别为1.81％±0.46％和3.15％±0.94％,明显高于健康人皮肤组织（0.90％±0.35％,F=14.23,P＜0.01）和原代成纤维细胞（0.17％±0.29％,F=37.62,P＜0.01）.结论 瘢痕疙瘩成纤维细胞中p16基因甲基化及其低表达与瘢痕疙瘩的失控性生长可能相关,DNA甲基转移酶在其发病中可能起一定作用.Objective To explore the role of p16 gene methylation in fibroblasts in the occurrence and development of keloid.Methods Skin tissue specimens were resected from the lesions of patients with keloid and normal skin of healthy human controls.Fibroblasts were isolated from these tissue specimens and subjected a primary culture.An immunohistochemical analysis was performed to measure the expression of p16 protein in tissue specimens,real-time fluorescence-based quantitative PCR to determine the mRNA expression level （expressed as 2-△△Ct） of p 16 and DNA methyltransferases （DNMTs） in fibmblasts,and bisulfite sequencing PCR （BSP） to estimate the methylation status of p16 gene in the tissue specimens and primary fibroblasts.Results The keloid fibroblasts （KFbs） showed significandy lower mRNA expression of p16 gene （0.64 ± 0.18 vs.1.92 ± 0.23,t =10.54,P〈 0.05）,but significantly higher mRNA expressions of 3 DNMTs （DNMT1：2.58 ± 0.23 vs.1.13 ± 0.21,t =11.22,P 〈 0.05; DNMT3A：4.87 ± 0.46 vs.2.38 ± 0.32,t =10.81,P〈 0.05; DNMT3B：1.57 ± 0.12 vs.0.57 ± 0.16,t =12.45,P〈 0.05） compared with the normal fibmblasts （NFbs）.The DNA methylation rate in the p16 gene promoter region was significantly increased in keloid tissue （1.81% ± 0.46%） and KFbs （3.15% ± 0.94%） compared with normal skin tissue （0.90% ± 0.35%,F =14.23,P〈 0.01） and NFbs （0.17% ± 0.29%,F=37.62,P〈 0.01）.Conclusions The methylation and low expression of p16 gene in KFbs may be associated with the uncontrolled growth of keloid,and DNMTs may play a role in the pathogenesis of keloid.

关 键 词：瘢痕疙瘩 成纤维细胞 基因 p16 甲基化 甲基转移酶类 

分 类 号：R622[医药卫生—整形外科]