靶向RECQL4基因的shRNA慢病毒表达载体的构建及鉴定  

作　　者：陈泓磊[1] 吴晓滨[1] 王华摄[1] 林义佳[1] 彭俊生[1] 

机构地区：[1]中山大学附属第六医院食管胃肠外科,广州510655

出　　处：《广东医学》2015年第5期685-687,共3页Guangdong Medical Journal

基　　金：广东省科技计划项目(编号:2010B031500009);高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(编号:2011017110075)

摘　　要：目的构建介导RECQL4 RNA干扰的shRNA慢病毒表达载体。方法将人工合成的RECQL4 siRNA经PCR扩增后与线化的p LKO.1慢病毒表达载体连接,经测序鉴定后,将p LKO.1-RECQL4-shRNA与慢病毒包装质粒共转染入HEK-293T细胞,产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度。体外感染人结肠癌细胞RKO后,实时定量PCR和Western blot检测RECQL4 mRNA和蛋白的沉默效果。设置未加入任何慢病毒表达载体的RKO细胞为未感染组,感染p LKO.1-scramble-shRNA慢病毒载体为阴性对照组。结果基因测序结果证实成功构建p LKO.1-RECQL4-shRNA慢病毒表达载体。测定包装后的慢病毒颗粒滴度为6.70×107IU/m L。感染RKO细胞后,RECQL4的mRNA和蛋白表达量均低于阴性组和未感染组。结论成功构建靶向RECQL4基因的shRNA慢病毒表达载体,可有效抑制人结肠癌RKO细胞RECQL4 mRNA和蛋白的表达。

关 键 词：慢病毒表达载体 RECQL4 结肠癌 

分 类 号：R392.12[医药卫生—免疫学]