用改良的非同位素凝胶电泳迁移实验鉴定核酸适配体与靶蛋白的结合  

A Modified Non-Isotope EMSA Technique for Identification of Aptamer Binding to its Target Protein

作　　者：葛兴枫 李慧[2] 李少华[2] 丁红梅[2] 黄皑雪[2] 白琛俊 刘雪梅[2] 李洁[2] 邵宁生[2] 

机构地区：[1]广西医科大学,广西南宁530021 [2]军事医学科学院基础医学研究所,北京100850

出　　处：《生物技术通讯》2015年第2期249-251,共3页Letters in Biotechnology

基　　金：国家高技术研究发展计划(2012AA022501)

摘　　要：目的:在核酸适配体与靶蛋白特异结合的凝胶电泳迁移实验(EMSA)测定方法中,探索使用非同位素标记取代同位素标记。方法:取一定量的生物素标记的核酸适配体与靶蛋白(或无关蛋白)于室温孵育,聚丙烯酰胺非变性凝胶电泳后将核酸适配体湿转至带正电荷的尼龙膜上,紫外交联,经蛋白酶K消化后,用化学发光法检测。结果:与未使用蛋白酶K消化组相比,经蛋白酶K消化后,可明显呈现核酸适配体与靶蛋白特异结合后产生的阻滞条带,其灵敏度不次于同位素标记的检测方法。结论:经蛋白酶K消化步骤优化的生物素标记的EMSA方法,可以替代放射性同位素标记的EMSA方法,用于核酸适配体与靶蛋白结合情况的鉴定。Objective： Using non-isotope electrophoretic mobility shift assay（EMSA） to replace isotope-labeled EMSA method for detecting aptamer specifically binding to its target protein. Methods： Biotin-labeled ssDNA aptamer incubated with the target protein（or unrelated protein） at room temperature, the ssDNA-protein complex were run onto a non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis and then transfered to nylon membrane. After UV cross-linking, proteinase K digestion, the shift bands were observed by chemiluminescence method. Results：After proteinase K digestion, the shift bands of ssDNA aptamer to its target protein could be clearly observed and the sensitivity is similar to the isotope-labeled EMSA method. Conclusion： The biotin-labeled EMSA method with proteinase K digestion could be used for the detection of binding of ssDNA aptamer to its target.

关 键 词：凝胶电泳迁移实验 适配体 凝胶电泳 非同位素标记 

分 类 号：Q503[生物学—生物化学]