脊髓自噬功能的激活在大鼠糖尿病神经病理性疼痛中的作用  

Activated autophagy in spinal cord contributes to maintaining diabetic neuropathic pain in rats model

作　　者：贺俭[1] 王汉兵[1] 赵伟成[1] 何万友[1] 廖美娟[1] 杨承祥[1] 

机构地区：[1]佛山市第一人民医院麻醉科,广东省528000

出　　处：《中华医学杂志》2015年第14期1074-1077,共4页National Medical Journal of China

基　　金：广东省自然科学基金（S2011010003506）

摘　　要：目的观察糖尿病神经病理性疼痛大鼠脊髓自噬功能的变化及其在神经病理性疼痛中的作用。方法成年健康雄性SPF级SD大鼠44只，随机分为正常对照组（N组，8只）和糖尿病组（36只）。糖尿病组大鼠腹腔单次注射链脲佐菌素60mg／kg建立模型。造模4周时，机械缩足阈值（MWT）较基础值下降〉50％定为糖尿病神经病理性疼痛（DNP）大鼠，再随机分为3组，神经病理性疼痛组（DP组），神经病理性疼痛＋雷帕霉素组（DR组），神经病理性疼痛＋三甲基嘌呤（3-MA）组（DA组），每组8只。DR组在DNP造模成功后腹腔注射雷帕霉素1mg／kg，1次／d，连续注射14d；DA组在同时间点腹腔注射3-MA2mg／kg；DP组和N组大鼠在同时间点腹腔注射等容量磷酸盐缓冲液（PBS）。利用yon Frey纤维丝测定大鼠MWT值，采用蛋白免疫印迹法测定大鼠脊髓自噬相关蛋白LC3-Ⅱ，Beclin-1，P62的表达水平。结果DR组大鼠给药后第3、5、7、9、14天MWT较给药前降低[（4．8±0．8）、（4．3±0．7）、（4．1±0．6）、（3．6±0．5）、（3．3±0．6）g比（5．3±0．9）g，均P〈0．05]；DA组从给药后第5、7、9、14天MWT升高[（7．0±0．8）、（7．7±1．0）、（9．1±0．9）、（9．6±1．1）g比（5．3±0．6）g，均P〈0．05]。与DP组相比，DR组大鼠脊髓LC3-Ⅱ（1．32±0．12比1．02±0．11，P〈0．05）和Beclin-1蛋白（1．03±0．08比0．80±0．06，P〈0．05）表达升高，P62蛋白表达降低（0．21±0．05比0．47±0．06，P〈0．05）；DA组大鼠脊髓LC3-Ⅱ（0．70±0．09比1．02±0．11，P〈0．05）和Beclin-1（0．55±0．05比0．80±0．06，P〈0．05）蛋白表达降低，P62蛋白表达升高（0．71±0．06比0．47±0．06P〈0．05）。结论脊髓自噬功能的激活参与大鼠糖尿病神经病理性疼痛的维持。Objective To observe the role of autophagy in maintaining diabetic neuropathic pain in rats model. Methods A total of 4.4 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into diabetic neuropathic （ n = 36） and normal control （ n = 8 ） groups. Diabetes was induced by a single intraperitoneal injection of streptozotocin （ STZ ） （ 60 mg/kg body weight, i. p） freshly dissolved in citrate buffer （ pH = 4. 5 ）. For assessing the presence of mechanical hyperalgesia in diabetic rats, mechanical paw-withdrawal threshold （MWT） in response to punctuate mechanical stimuli was measured. At Week 4 post-injection, the rats with mechanical pain threshold decreasing over 50% as compared to baseline were designated as diabetic ueuropathic pain rats. They were randomly divided into three groups of neuropathic pain （ DP）, neuropathic pain plus rapamycin （DR） and neuropathic pain plus 3-methyladenine （ 3-MA ） （DA）. The DR group received an intraperitoneal injection of rapamycin （1 mg/kg body weight ） for Day 1 to Day 14 after grouping. At the same timepoint, the DA group had an intraperitoneal injection of 3-MA （2 mg/kg body weight） and the other group phosphate buffered saline （PBS） （1 ml/kg body weight）. MWT was measured at week 1, 2, 3, 4 after STZ injection and at day 1, 3, 5, 7, 9, 14 after rapamycin, 3-MA or PBS injections. Spinal cord tissues were used to examine the expression of LC3, Beclin-1 and P62 protein byWestern blot at Day 14 after medication. Results The mechanical threshold of group DR decreased further from Day 3 to Day 14 after rapamycin injection compared to baseline [ （4. 8 ±0. 8）, （4. 3 ±0. 7）, （4. 1 ± 0. 6）, （3.6 ± 0. 5 ）, （3.3 ± 0. 6） vs （5. 3 ± 0. 9 ） g, P 〈 0. 05 ]. The mechanical threshold of group DA began to increase from Day 5 to Day 14 after 3-MA injection [ （ 7. 0 ± 0. 8 ）, （ 7.7 ± 1.0 ）, （ 9. 1 ± 0. 9 ）, （ 9. 6 ± 1.1 ） vs （ 5. 3 ± 0. 6 ） g, P 〈 0. 05 ]. The expressions of LC3-II and Becli

关 键 词：糖尿病 神经痛 脊髓 自噬 

分 类 号：R587.2[医药卫生—内分泌]