石斛SRAP扩增体系的建立与优化  

Establishment and optimization of SRAP reaction system for Dendrobium

作　　者：陈美霞[1] 朱文宁 孙焕[1] 王君红[1] 魏日凤[3] 刘伟[1] 

机构地区：[1]宁德师范学院,福建宁德352100 [2]河南科迪食品集团股份有限公司,河南商丘476343 [3]福建农林大学,福建福州350000

出　　处：《宁德师范学院学报（自然科学版）》2015年第1期29-33,共5页Journal of Ningde Normal University(Natural Science)

基　　金：福建省教育厅科技项目(JA12340);福建省科技厅自然科学基金项目(2012J05060);宁德师范学院服务海西重大项目(2010H104);福建省宁德师范学院人才引进项目;宁德师范学院教务处资助项目;福建省科技计划重点项目(2012R0068)

摘　　要：以石斛为研究材料,探索SRAP-PCR反应体系,对主要影响因子模板DNA、d NTP、Buffer、引物以及Taq DNA聚合酶进行单因素不同梯度试验,最终建立一套适用于石斛属植物的稳定性强、带型清晰的SRAP最佳反应体系.结果如下:模板DNA 20ng/μL 3μL,d NTP 0.25m M 2.5μL,10×PCR Buffer 3.0μL,引物4μM 4.0μL,Taq DNA聚合酶0.25μL.PCR群体扩增结果表明:该体系完全满足石斛基因组SRAP扩增要求.The SRAP-PCR reaction system for amplifying the Dendrobium genomic DNA was established and optimized using gradient experiment, including DNA template concentration, dNTP, PCR Buffer, primer concentration, and Taq DNA polymorphism. The stable reaction system could amplify high levels of polymorphism, good repeatability and clear band patterns. SRAP system （total volume of 20μL） established was as follows： template DNA 20 ng/μL 3μL, dNTP 0.25mM 2.5μL, 10xPCR Buffer 3.0μL, primer 4 μM 4.0 μL, Taq polymorphism 0.25 μL. The system could meet the demands of genome SRAP-PCR amplification for Dendrobium.

关 键 词：石斛 建立与优化 

分 类 号：S326[农业科学—作物遗传育种]