金黄色葡萄球菌腺苷酰转移酶耐药基因的克隆及其原核表达  

作　　者：陈洪升[1] 周帅 陈吟霜 谢永强 张咏莉[1] 周珍文 

机构地区：[1]广东药学院,510006 [2]广州市妇女儿童医疗中心

出　　处：《中国实用医药》2015年第12期281-283,共3页China Practical Medicine

基　　金：广州市医药科技重点项目(项目编号:201102A212013);广州市医药科技项目(项目编号:20131A011053)

摘　　要：目的在大肠杆菌中克隆、表达金黄色葡萄球菌氨基糖苷类耐药基因:腺苷酰转移酶基因,为其功能研究奠定基础。方法按金黄色葡萄球菌腺苷酰转移酶蛋白编码序列设计引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,扩增腺苷酰转移酶基因。将所得片段与p GEX-4t-1(+)载体连接,转化到感受态大肠杆菌BL21(DE3),提取质粒进行双酶切及测序鉴定,IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE及Western-blot对重组蛋白进行鉴定。结果使用金黄色葡萄球菌基因组为模板,成功扩增约800 bp目的片段,重组质粒双酶切见目的片段,测序显示腺苷酰转移酶基因长783 bp,启始于ATG,终止于TAG,预测的等电点及分子量分别为7.75、28975.44,目的基因与Genbank金葡腺苷酰转移酶同源性为99%,SDS-PAGE及Western-blot显示在55 k D左右见重组蛋白表达。结论在大肠杆菌中成功克隆、表达了金黄色葡萄球菌腺苷酰转移酶基因,为其功能研究提供了物质基础。

关 键 词：金黄色葡萄球菌 腺苷酰转移酶 耐药基因 克隆 表达 

分 类 号：R378[医药卫生—病原生物学]