与登革病毒NS4A蛋白相互作用的宿主蛋白的鉴定  

Identification of host factors that interact with NS4A of dengue virus

作　　者：陈小燕[1] 夏君[1] 刘静宇[2] 张萍[1] 

机构地区：[1]中山大学中山医学院免疫学教研室,广东广州510080 [2]广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,广东广州510623

出　　处：《热带医学杂志》2015年第4期433-436,共4页Journal of Tropical Medicine

基　　金：国家自然科学基金(81171576;81371794);广东省自然科学基金(S2013010016454)

摘　　要：目的鉴定与登革病毒NS4A蛋白发生相互作用的宿主蛋白。方法利用串联亲和纯化系统(TAP)纯化分离与NS4A相互作用的蛋白,进行质谱分析,鉴定可能与NS4A相互作用的蛋白;构建其真核表达质粒,通过蛋白免疫共沉淀技术验证其相互作用。结果质谱结果表明α磷酸烯醇酶(Eno-1)可能与登革病毒的NS4A存在相互作用,在p SG5载体中构建了C端带FLAG标签的p SG5-Eno-1-FLAG重组质粒,并检测到其真核表达。共表达p SG5-Eno-1-FLAG和p SG5-NS4A-HA重组质粒,双向蛋白免疫共沉淀实验进一步证实了Eno-1是与NS4A相互作用的宿主蛋白。结论宿主蛋白Eno-1与登革病毒NS4A存在相互作用,为进一步阐明NS4A在登革病毒复制过程中的调控机制奠定了基础。Objective To identify host factors that interacts with dengue virus protein NS4 A.Methods Tandem affinity purification（TAP） approach and mass spectrometry（MS） analysis were used to screen novel host proteins that interact with Dengue virus protein NS4 A.To further verify their interaction,expression of target genes in eukaryotic cells and co-immunoprecipitation（Co-IP） assay were used.Results The mass spectrometry results showed that cellular protein Eno-1 may interact with NS4 A,furthermore,we successfully cloned and expressed Eno-1 gene into eukaryotic expression vector p SG5.To further verify their interaction,plasmids expressing Eno-1-FLAG and NS4A-HA fusion proteins were cotransfected,and the interaction between Eno-1 and NS4 A were further verified by co-immunoprecipitation（co-IP） assay.Conclusion Eno-1 interacted with the dengue virus protein NS4 A.This study could provide a basis for further study on the role of NS4 A in dengue virus replication.

关 键 词：登革病毒 NS4A Eno-1 

分 类 号：R373.33[医药卫生—病原生物学]