云南撒坝猪致病性大肠埃希菌外膜蛋白F(OmpF)缺失株的构建  

作　　者：吴程华[1] 崔艳艳[1] 高洪[1] 严玉霖[1] 赵汝[1] 

机构地区：[1]云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明650201

出　　处：《上海畜牧兽医通讯》2015年第4期22-25,共4页Shanghai Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine

基　　金：国家自然科学基金(项目批准号:31260594);云南省高校科技创新团队支持计划资助(云教科〔2011〕14号);云南省现代农业生猪产业技术体系建设(云财农〔2009〕171号)

摘　　要：为了进一步评价E.coli OmpF的功能,我们构建了E.coli外膜蛋白F的缺失突变株。首先根据E.coli F-M-2的测序后的OmpF基因序列设计PCR敲除引物,引物5’端分别有50bp和48bp的拟敲除基因的同源臂,3’端为扩增引物,以pKD3为模板,扩增两侧含FRT位点的氯霉素抗性基因,然后利用pKD46的λ-Red重组系统替换E.coli F-M-2基因组上的OmpF基因,再利用表达FLP重组酶的质粒pCP20将FRT位点之间的氯霉素抗性基因删除,最后用鉴定引物进行鉴定并测序。结果成功地构建了云南撒坝猪致病性E.coli OmpF缺失突变株。

关 键 词：外膜蛋白F 撒坝猪致病性大肠埃希菌 λ-Red重组系统 基因敲除 聚丙烯酰胺凝胶电泳 

分 类 号：S852.61[农业科学—基础兽医学]