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作 者:尹可欣[1] 迟象阳[1] 任军[1] 房婷[1] 刘树玲[1] 刘炬[1] 杨秀旭[1] 李建民[1] 于长明[1]
机构地区:[1]军事医学科学院生物工程研究所疫苗与抗体工程研究室,北京100071
出 处:《生物技术通讯》2015年第4期460-465,共6页Letters in Biotechnology
基 金:国家自然科学基金(81172980)
摘 要:目的:筛选鼠疫耶尔森菌F1抗原的中和性表位,构建基于鞭毛蛋白佐剂的重组表位疫苗。方法:利用鼠疫菌F1抗原的中和抗体F2H5筛选噬菌体随机12肽库,对得到的阳性克隆采用ELISA进行特异性鉴定,采用竞争抑制ELISA确定具有竞争性的噬菌体单克隆并对其DNA测序,重组表达并纯化获得肽序列与截短型鞭毛蛋白Fli Cdel的融合蛋白,并通过Western印迹和ELISA鉴定重组蛋白与F2H5的结合。结果:获得了2株能够与F1抗原竞争结合F2H5的噬菌体单克隆12-1和12-14,其中12-14的竞争能力较强;通过序列比对,并没有发现这2株噬菌体克隆的插入肽序列与F1抗原序列存在一致性,但这2个插入肽序列与Fli Cdel的重组蛋白在Western印迹和ELISA结果中均显示出能够被抗F1的单克隆抗体识别。结论:F1中和性抗体筛选出的肽序列与截短的鞭毛蛋白融合表达后能够被F2H5特异性识别,为进一步对重组表位抗原进行免疫保护评价奠定了基础。Objective:To obtain the neutralizing epitope of Yersinia pestis F1 antigen and construct recombinantepitope vaccine based on flagellin adjuvants.Methods:A phage display random 12 peptide library was bio-panned by the neutralizing antibody of F1 antigen-F2H5.The positive clones were identified by ELISA and com-petitive inhibition ELISA.The recombinant fusion proteins containing the selected 12 peptide and truncated flagel-lin C protein were expressed and purified,detected by Western blot and ELISA using neutralizing antibody F2H5.Results:Two positive phage monoclones 12-1 and 12-14 can compete to bind F2H5 with F1 antigen,the compe-tition ability of 12-14 was stronger.The inserted peptide sequences of the two positive phage monoclones were noconsistent with F1 antigen sequence by sequence alignment,but the recombinant fusion proteins containing insert-ed peptide and Fli Cdel can be detected by monoclonal antibody against F1 using Western blot and ELISA analy-sis.Conclusion:The peptide sequence screening by F1 neutralizing antibody can be identified by F2H5 specifical-ly,which laid the foundation for the further immune response evaluation of the recombinant epitope antigen.
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