假坚强芽孢杆菌丙氨酸脱氢酶的原核表达纯化与结晶  

Prokaryotic Expression,Purification and Crystallization of Alanine Dehydrogenase in Bacillus pseudofirmus

作　　者：唐昭娜 张翠英[1] 胡平雄[1,2] 易秋分 杨江丽[1,2] 董辉[2] 

机构地区：[1]天津科技大学生物工程学院,天津300457 [2]天津国际生物医药联合研究院,天津300457

出　　处：《天津科技大学学报》2015年第4期21-24,77,共5页Journal of Tianjin University of Science & Technology

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金资助项目(31300601)

摘　　要：丙氨酸脱氢酶(alanine dehydrogenase,Ald)是一种NAD+依赖性的氨基酸脱氢酶,能可逆地催化丙氨酸氧化脱氨生成丙酮酸和氨.实验以假坚强芽孢杆菌的丙氨酸脱氢酶为研究对象,将目的基因克隆到p ET-22,b(+)原核表达载体上,并在大肠杆菌中完成蛋白的高效表达.通过镍离子亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析等纯化方法,得到了高纯度的目的蛋白.利用气相扩散法对目的蛋白进行结晶,最终得到分辨率为0.31,nm的蛋白晶体.Alanine dehydrogenase （Ald） is a NAD＋-dependent amino acid dehydrogenase. It catalyzes the reversible oxidative deamination of L-alanine to pyruvate and ammonia. An Aid gene from Bacillus pseudofirmus was cloned into the prokaryotic expression vector pET-22 b （ ＋ ） and the Ald protein was overexpressed in Escherichia coll. The Ald protein was purified by Ni2＋-chelating affinity chromatography, anion-exchange chromatography and gel filtration chromatography. Crystals were grown with the vapour-diffusion method and diffracted to 0.31 nm resolution.

关 键 词：丙氨酸脱氢酶 表达 纯化 结晶 

分 类 号：Q518.2[生物学—生物化学]