猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp9与宿主CALM2基因编码钙调蛋白的相互作用研究  

Identification of the host CALM2 gene-encoded calmodulin interacting with porcine reproductive and respiratory syndrome virus Nsp9

作　　者：胡亮[1] 郭东伟[1] 李江南[1] 尹曼曼[1] 黄丽[1] 翁长江[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与分子流行病学团队,黑龙江哈尔滨150001

出　　处：《中国预防兽医学报》2015年第9期674-678,共5页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：国家自然科学基金(31172333)

摘　　要：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白Nsp9为该病毒RNA依赖的RNA聚合酶(Rd Rp),在病毒的转录复制过程中发挥关键性作用。为筛选与Nsp9相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交方法,以PRRSV Nsp9为诱饵蛋白,从猪肺泡巨噬细胞(PAM)酵母表达c DNA文库中筛选到CALM2(Calmodulin 2)基因。酵母回返验证试验和免疫共沉淀(Co-IP)试验证明CALM2基因编码的钙调蛋白(Ca M)与Nsp9特异地相互作用。激光共聚焦试验表明Ca M与Nsp9共定位于HEK293细胞胞浆内。本研究筛选到一个与Nsp9相互作用的新宿主蛋白Ca M,但该蛋白是否直接参与PRRSV的复制过程还有待进一步研究。Porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV） nonstructural protein 9 （Nsp9）, the RNA-dependent RNA polymerase （RdRp）, plays critical roles during the virus replication and transcription. To determine the host proteins interacting with Nsp9, the porcine alveolar macrophage （PAM） expression library was screened by the bait Nsp9 through the yeast two-hybrid （Y2H） system, and CALM2 （calmodulin 2） gene was identified. Yeast retest and co-immunoprecipitation （Co-IP） assays confirmed the imeraction of CALM2-encoded calmodulin （CAM） and Nsp9 and the confocal assay indicated their colocalization in the cytoplasm of HEK293 cell. These results indicated that CaM was a novel binding partner of PRRSV Nsp9. However, whether CaM is directly involved in PRRSV replication remains to be investigated.

关 键 词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp9 酵母双杂交 肺泡巨噬细胞 钙调蛋白 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]