金铁锁全长cDNA文库的SMARTer技术构建  

作　　者：李国栋[1] 赵爽[1] 刘小莉[1] 杨耀文[1] 钱子刚[1] 

机构地区：[1]云南中医学院中药学院,云南昆明650500

出　　处：《时珍国医国药》2015年第8期2014-2016,共3页Lishizhen Medicine and Materia Medica Research

基　　金：国家自然科学基金(No.81260609);云南省自然科学基金资助项目(No.2014FD035);云南省教育厅科学研究基金(No.2014Y229);云南白药;云南中医学院中医药教育创新基金(No.YB2014507)

摘　　要：目的构建金铁锁全长cDNA文库,为进一步开展金铁锁次生代谢合成途径相关基因的研究奠定基础。方法利用Rneasy Plant Mini Kit(Qiagen)试剂盒提取金铁锁根部总RNA,通过SMARTer(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术构建全长cDNA文库,测定分析文库重组率及插入片段大小,对文库进行随机测序并通过Blastx分析后在Genbank中进行同源性检索和功能分析。结果使用SMARTer技术构建的金铁锁cDNA文库的质量较高,在随机挑选的单菌落克隆中都有插入片段,重组率为100%;在15个单克隆中,扩增片段长度在750bp以上的有14个,占93.3%。结论利用SMARTer技术成功构建了金铁锁根部的全长cDNA文库,该文库可用于金铁锁今后功能基因组鉴定、新基因筛选及次生代谢产物生物合成的表达调控研究。

关 键 词：金铁锁 全长CDNA文库 SMARTer 

分 类 号：R2-03[医药卫生—中医学]