Chn1基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株的构建和鉴定  

作　　者：熊玮[1,2] 董少红[1,2] 张键[3] 李江华[1,2] 吴美善[1,2] 廖碧红[1,2] 庞新利[1,2] 罗林杰[1,2] 

机构地区：[1]暨南大学第二临床医学院 [2]广东省深圳市人民医院心内科,518020 [3]中国科学院深圳先进技术研究院,广东深圳518055

出　　处：《广东医学》2015年第16期2495-2498,共4页Guangdong Medical Journal

基　　金：广东省深圳市重点资助科技计划项目(编号:201201022)

摘　　要：目的通过慢病毒介导的RNA干扰技术,构建趋化素基因Chn1的小分子干扰RNA慢病毒表达载体,建立Chn1基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株,为下一步采用该细胞株研究趋化素与冠状动脉介入治疗后再狭窄的关系奠定实验基础。方法以小鼠Chn1基因mRNA序列作为干扰靶点,设计3组靶向Chn1的shRNA序列,构建慢病毒载体,并筛选出干扰最佳的shRNA,在293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养小鼠血管平滑肌细胞,转染慢病毒形成Chn1基因缺陷性血管平滑肌细胞株,用实时定量荧光(real time)PCR检测感染慢病毒后细胞中Chn1 mRNA水平。结果基因测序结果表明慢病毒载体构建成功,慢病毒的滴度约为7.4×106TU/m L。3个p LVX-shRNA均能下调Chn1 mRNA,其中p LVX-shRNA3的沉默效果最明显(P<0.01)。将干扰效果最佳的慢病毒载体p LVX-shRNA3包装慢病毒并转染至血管平滑肌细胞中形成基因缺陷细胞株,用real time PCR血管平滑肌细胞中Chn1 mRNA水平,该细胞株中Chn1 mRNA水平显著下降(P<0.01)。结论慢病毒介导的siRNA可有效沉默血管平滑肌细胞中Chn1基因的表达。

关 键 词：血管平滑肌细胞 趋化素 Chn1基因 RNA干扰 慢病毒 

分 类 号：R543[医药卫生—心血管疾病]