利用串联亲和纯化的方法筛选耻垢分枝杆菌中MutM的相互作用蛋白  

Mut M Interaction Partners Detected in Mycobacterium smegmatis by Tandem Affinity Purification

作　　者：范尚华 周盈[2] 张泓泰[2] Joy Fleming 喻子牛[1] 张先恩[2] 毕利军[2] 

机构地区：[1]华中农业大学生命科学技术学院,农业微生物学国家重点实验室,武汉430070 [2]中国科学院生物物理研究所,中国科学院核酸生物学重点实验室和生物大分子国家重点实验室,北京100101

出　　处：《生物化学与生物物理进展》2015年第10期935-946,共12页Progress In Biochemistry and Biophysics

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973)(2011CB910302);国家科学自然基金(31400127)资助项目~~

摘　　要：Mut M(formamidopyrimidine-DNA glycosylase,Fpg)是原核生物碱基切除修复系统(BER)中同时具有DNA糖苷酶和脱嘌呤/脱嘧啶AP裂解酶活性的一种双功能酶,不但可以识别DNA损伤,而且能切除损伤的碱基,从而参与到许多种损伤的修复过程.除了高致突变率的8-羟基鸟嘌呤(8-oxoguanine,8-oxo G)外,Mut M在其他损伤修复中具体作用机制还不清楚.本研究主要以耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)为研究对象,利用串联亲和纯化技术和质谱相结合的方法对可能与Mut M相互作用的蛋白因子进行发现和鉴定,并于体外用Far-western和GST pull-down方法对鉴定出的蛋白DEAD-box rna helicase、Rps C、Uvr A与Mut M的相互作用进行了验证.实验结果表明,利用串联亲和纯化方法来发现Mut M相互作用的蛋白是切实可行的.本研究为进一步深入研究Mut M在其参与的损伤修复中的具体机制提供了切入点.Mut M（Formamidopyrimidine-DNA glycosylase, Fpg）, a bifunctional base excision repair enzyme（DNA glycosylase/AP lyase）, is involved in the repair of many kinds of DNA damage, including the formation of8-oxoguanine, 5-formyluracil, and C/C mismatches, through recognizing DNA damage and removing damaged bases. The mechanisms of Mut M involvement, however, with the exception of 8-oxo G, are poorly understood.Here, we identified proteins which interact with Mut M in Mycobacterium smegmatis using methods of tandem affinity purification and mass spectrometry and used Far-western and GST pull-down analysis to validate the interactions between Mut M and DEAD-box rna helicase, Rps C, and Uvr A. Results demonstrated that tandem affinity purification is a suitable method for identifying Mut M interacting proteins and provided insights into the mechanism by which Mut M is involved in DNA damage repair.

关 键 词：耻垢分枝杆菌 碱基切除修复 MutM 串联亲和纯化 

分 类 号：Q5[生物学—生物化学] Q7