猪Viperin主要抗原区的原核表达及多克隆抗体的制备  

作　　者：李文良[1] 韩林晓[2] 毛立[1] 杨蕾蕾[1] 张纹纹[1] 江杰元[1] 

机构地区：[1]江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014 [2]南京农业大学动物医学院,江苏南京210095

出　　处：《畜牧与兽医》2015年第10期82-85,共4页Animal Husbandry & Veterinary Medicine

基　　金：江苏省自然科学基金项目(BK20130729);江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(12)5049)

摘　　要：采用PCR方法扩增猪Viperin蛋白主要抗原区基因,克隆入原核表达载体p ET32a,转化大肠杆菌BL21构建重组表达菌,经IPTG诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE鉴定蛋白得到表达,分子质量约为40 ku。进一步优化蛋白表达条件为:IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导5 h。采用His标签单抗对重组蛋白进行Western blot鉴定表明蛋白具有良好的抗原性。将蛋白质纯化后免疫新西兰大白兔,间隔14 d免疫4次,并采集血清。用间接ELISA方法测定血清抗体效价,结果表明,经过4次免疫血清抗体效价达到1∶409600,间接免疫荧光检测出现特异荧光,表明其能与Viperin蛋白发生反应。本试验为研究Viperin的功能、建立特异的检测方法奠定了基础。

关 键 词：Viperin 原核表达 多克隆抗体 猪 

分 类 号：S855.3[农业科学—临床兽医学]