反相C18固相萃取小柱用于蛋白质组分析中少量样品预处理  

Application of reverse phase C18 tip in pretreatment of small amount complex proteomic samples

作　　者：王丹琪[1] 孙伟[1] 邹丽莉[1] 王曌[1] 

机构地区：[1]中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所中心实验室,北京100005

出　　处：《生物工程学报》2015年第11期1643-1650,共8页Chinese Journal of Biotechnology

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973计划)(Nos.2013CB530805;2014CBA02005);中国科技部重点基础研究计划(No.2013FY114100)资助~~

摘　　要：针对少量且复杂蛋白质组样品,开发一种耗时短、操作简便的分离方法。以人的脑海马组织蛋白样品为研究对象,采用反相C18固相萃取小柱,采用不同乙腈浓度对酶切后样品进行梯度洗脱,与反相高效液相色谱法对比分离效果。通过比较不同乙腈梯度洗脱方案所鉴定到的谱图数、非冗余多肽数、蛋白数和各洗脱组分间重复率分析,确定一种样品量少、简单易行、分离效果好的实验方案。虽然反相C18固相萃取小柱法鉴定蛋白总数占高效液相色谱法的85.5%,但其操作简单,耗时少。通过4种不同乙腈浓度方案比较,确定乙腈洗脱浓度优化为5%、15%、20%和90%时,分离30μg人的海马多肽混合物可以得到较优的分离效果。其蛋白鉴定数为反相液相色谱法的67.0%,且重复性良好。该结果证实反相C18固相萃取小柱分离效果比反相高效液相色谱法稍差,但此方法可以分离少量复杂蛋白质组样品。该方法分离样品充分,操作易行,耗时短,是进行蛋白质组学分析中少量样品的一个简便预处理方法。To develop a timesaving and easy operating Reverse Phase（RP） chromatography method, we adopted Thermo Pierce~#174; RP C18 Tip to separate small amount hippocampus peptide mixtures and to compare with high performance liquid chromatography（HPLC）. According to the separation performance of 4 ACN gradient optimization methods, we determined the best ACN concentration gradient. The results showed that, the experiment took only 10 min by separating with eight ACN concentration gradient, which accounted 1/4 for HPLC. But as for the identified proteins, RP C18 Tip accounted 85.5% for HPLC. ACN gradient of 5%, 15%, 20% and 90% had best repeatability（P=0.429） and result for separating 30 μg peptides. This method is easy to operate, timesaving and has low cost. It could be used into pretreatment of small amount complex proteomic samples.

关 键 词：反相色谱 C18固相萃取小柱 乙腈浓度 多肽分离 蛋白鉴定 

分 类 号：Q503[生物学—生物化学]