表达鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性  

Construction and characterization of a recombinant duck enteritis virus expressing E protein of duck Tembusu virus

作　　者：陈柳[1] 余斌[1] 倪征[1] 华炯钢[1] 叶伟成[1] 云涛[1] 张存[1] 

机构地区：[1]浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州310021

出　　处：《浙江农业学报》2015年第11期1889-1895,共7页Acta Agriculturae Zhejiangensis

基　　金：浙江省科技计划项目优先主题重点国际科技合作研究项目(2011C14011);浙江省重点科技创新团队项目(2010R50027);浙江省自然科学基金项目(LY15C180002;LY13C180002)

摘　　要：为开展鸭瘟病毒-鸭坦布苏病毒二联苗的研究,将密码子优化的鸭坦布苏病毒(DTMUV)E基因插入转移载体p EP-BGH-end构建了p EP-BGH-E重组表达质粒。在鸭瘟病毒疫苗株细菌人工染色体(p DEVvac)的基础上,首先通过Red E/T两步重组法构建了EF1启动子替换GFP基因CMV启动子的p DEV-EF1突变体克隆,并将p EP-BGH-E质粒上的重组表达框p CMV-E-BGH-p A再次通过两步重组克隆至p DEV-EF1突变体的US7和US8基因之间,构建了携带有外源基因DTMUV E的突变体克隆p DEV-E。用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)获得了重组病毒r DEV-E。病毒蚀斑大小测定结果显示,r DEV-E在CEFs上的蚀斑面积较亲本株相比稍有减少。Western blotting分析表明,外源蛋白E在病毒感染的CEFs细胞中成功表达。To develop duck enteritis virus（ DEV） and duck Tembusu virus（ DTMUV） bivalent vaccine,the recombinant plasmid p EP-BGH-E（ containing expression cassette p CMV-E-BGH-p A） was constructed by inserting codonoptimized DTMUV E gene into the expression vector p EP-BGH-end. The BAC clone of p DEV-E was generated by twice Red / ET recombination in E. coli based on the bacterial artificial chromosome（ BAC） clone p DEV-vac which carried whole DEV genome. Firstly,the BAC clone p DEV-EF1 was constructed by replaced CMV promoter of GFP gene with EF1 promoter on p DEV-vac; then p DEV-E was constructed by inserting p CMV-E-BGH-p A between DEV US7 and US8 gene on p DEV-EF1. The recombinant virus r DEV-E was rescued from chicken embryo fibroblasts（ CEFs） transfected with p DEV-E by calcium phosphate precipitation. The plaque size of r DEV-E was slightly decreased compared with the parental virus r DEV-BAC. Western blotting analysis showed that DTMUV E protein wasexpressed in r DEV-E virus-infected CEFs.

关 键 词：鸭瘟病毒 鸭坦布苏病毒 E蛋白 细菌人工染色体 重组病毒 

分 类 号：S858.32[农业科学—临床兽医学] Q784[农业科学—兽医学]