猪呼吸道病相关的常见病毒PCR/RT-PCR检测方法的建立  

Establishment of PCR/RT-PCR for Detection of Some Viruses Associated with Swine Respiratory Disease

作　　者：韦冠东[1] 王洪光[1] 马萍[2] 汤德元[1] 张元鑫[2] 曾智勇[1] 刘霞[2] 唐宇[2] 李达[1] 

机构地区：[1]贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025 [2]贵州省动物疫病预防控制中心,贵州贵阳550008

出　　处：《动物医学进展》2015年第12期45-48,共4页Progress In Veterinary Medicine

基　　金：贵州省科学技术基金项目([2013]2110号);贵州省2014年农业攻关项目([2014]3055号)

摘　　要：为建立猪呼吸道病相关的几种病毒PCR/RT-PCR检测方法,根据GenBank登录的猪伪狂犬病病毒(PRV,gB,AF257079)、猪圆环病毒2型(PCV-2,ORF2,NC-005148)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV,ORF6,NC-001961)、猪瘟病毒(CSFV,C,AY805221)、猪细小病毒(PPV,NS1,NC-001718)和猪流感病毒(SIV,M,GU086140)6种常见病毒的相关保守基因序列分别设计一对特异性引物,通过对其条件的优化,建立了检测以上6种病毒的PCR/RT-PCR诊断方法,扩增的目的片段长度分别为192bp(PRV)、255bp(PCV-2)、364bp(PRRSV)、530bp(CSFV)、759bp(PPV)和981bp(SIV)。通过试验证明该检测方法具有良好的特异性和敏感性,对该6种病毒的核酸检测最小量依次为2.5×10-3ng、2.2×10-4ng、3.2×10-3ng、8.3×10-3ng、3.7×10-3ng和3.7×10-3ng,为检测以上6种病毒提供了参考。Six PCR and RT-PCR methods were established to detect the pseudorabies virus（PRV）,porcine circovirus type 2（PCV-2）,Porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV）,Classical swine fever virus（CSFV）,porcine parvovirus（PPV）and swine influenza virus（SIV）simultaneously with a set of specific primers designed according to the published viral genome sequences in GenBank in this experiment,and the PCR/RT-PCR products were 192（PRV）,255（PCV-2）,364（PRRSV）,530（CSFV）,759（PPV）,981（SIV）.The PCR and RT-PCR methods were proved with good sensitivity and high specificity,and the detection limit of the 6viruses were 2.5×10-3,2.2×10-4,3.2×10-3,8.3×10-3,3.7×10-3,3.7×10-3 ng,respectively.These PCR and RT-PCR assays established successfully were proved to be sensitive,specific for rapid and efficient detection of the six viruses.

关 键 词：猪伪狂犬病病毒 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 猪细小病毒 猪流感病毒 PCR/RT-PCR方法 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]