钙蛋白酶抑制剂ALLN、外源性泛素-蛋白酶体片段Ⅱ单用及联用对去血清饥饿诱导大鼠骨骼肌细胞凋亡降解的影响及机制  

Effects of n-acetyl-Leu-Leu-Norleucinal, ubiquitin/proteasome fraction Ⅱ alone or in combination on apopotosis of primary cultural SD rat skeletal muscle cells and the mechanism

作　　者：陈思曾[1] 霍雁飞[1] 戴志强[1] 王晓伟[1] 

机构地区：[1]福建医科大学附属第一医院胃肠外科,福州350005

出　　处：《中华实验外科杂志》2016年第1期163-166,共4页Chinese Journal of Experimental Surgery

基　　金：国家自然科学基金（81272465）

摘　　要：目的探讨钙蛋白酶抑制剂ALLN（n—acetyl-Leu—Leu—Norleucinal）与外源性泛素-蛋白酶体片段Ⅱ（UPFⅡ）单用及联用对去血清饥饿大鼠骨骼肌细胞凋亡的影响及机制。方法离体培养3～5日龄SD大鼠骨骼肌细胞，苏木素一伊红（HE）染色及骨骼肌肌动蛋白免疫荧光方法鉴定骨骼肌细胞，传至5～6代骨骼肌细胞稳定成熟，随机分为5组进行干预：A组（完全培养基对照组）、B组（去血清饥饿对照组）、C组（去血清饥饿＋UPFⅡ组）、D组（去血清饥饿＋UPFⅡ＋ALLN组）、E组（去血清饥饿＋ALLN组）。药物干预72h后，噻唑蓝（MTT）法测定各组细胞的存活率，实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测各组细胞中钙蛋白酶（Calpain）-3、肌肉环指蛋白-1（MuRF-1）、Atrogin-1的mRNA表达。结果MTT结果显示：与A组比较，B、C、D、E组细胞存活率分别为（57．89±5．07）％、（41．22±4．87）％、（56．94±6．02）％、（69．72±6．25）％，存活率均下降（P〈0．05）；FQ-PCR结果显示：与A组比较，B、C、D、E组Calpain-3、MuRF-1、Atrogin-1的mRNA表达量分别为23．71、23．18、22．22倍；24．52、24．10、23．29倍；23．78、23．11、22．15倍；22．60、22．37、21．65倍，差异有统计学意义（P〈0．05）；E组细胞存活率较B、C、D组均高（P〈0．05），各基因mRNA表达量均明显降低（P〈0．05）；D组细胞存活率较C组高（P〈0．05），各基因mRNA表达量均明显降低（P〈0．05）；B组与D组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论适量ALLN在一定程度上能有效降低去血清饥饿诱导大鼠骨骼肌细胞的凋亡率；适量ALLN在一定程度上可以减弱UPFⅡ对去血清饥饿大鼠骨骼肌细胞凋亡的促进作用。Objective To study the effects of Calpain inhibitor N - acetyl - Leu - Leu - Norleucinal （ALLN） and ubiquitin/proteasome fractionⅡ（ UPF Ⅱ ） alone or in combination on apoptosis of pri- macy cultured SD rat skeletal muscle cells. Methods The skeletal muscle cells of 3 - 5 - day old SD rats were cultured in vitro and identified by hematoxylin and eosin （HE） staining and skeletal muscle actin （ α - sarcometric actin） immunofluorescence. The skeletal muscle cells were mature and stable after five or six generations of passage, and then were randomly divided into 5 groups ： （ 1 ） complete medium ： group A （complete medium control group） ; （2） basal medium： group B （serum starvation control group）, group C （ serum starvation ＋ UPF Ⅱ ）, group D （ serum starvation ＋ UPF Ⅱ ＋ ALLN ）, group E （ serum starvation ＋ ALLN）. Seventy - two h after drug intervention, the surval rate of skeletal muscle cells was determined by methyl thiazol tetrazolium （MTT） assay and the mRNA expression of Calpain - 3, Muscle ringfinger - 1 （ MuRF - 1 ） and Atrogin - 1 in each group was detected by real - time fluorescent real - time fluorescent quantitative polymerase chain reaction （FQ - PCR）. Results The MTT results showed that cell survival rates in groups B, C, D and E was respectively （57.89 ±5.07） %, （41.22 ±4. 87 ） %, （56. 94 ±6. 02 ） %, and （ 69. 72 ±6. 25 ） %, which was significantly lower than in group A （ P 〈 0. 05 ）. FQ - PCR revealed that the mRNA expression of Calpain - 3, MuRF - 1, and Atrogin - 1 in groups B, C, D and E was respectively 23.71/23. 18/22. 22, 24. 52/24. 10/23.29, 23.78/23.11/22. 15, 22. 60/22. 37/21.65 times higher than in group A （P 〈 0. 05 for all）. The cell survival rate in group E was significantly higher （P 〈 0.05 ） and the expression of Calpain - 3, MuRF - 1, and Atrogin - 1 mRNA was significantly lower （ P 〈 0. 05 ） than groups B, C and D. The cell survival rate was significantly higher �

关 键 词：钙蛋白酶抑制剂 泛素-蛋白酶体 骨骼肌细胞 脱噬作用 

分 类 号：R681[医药卫生—骨科学]