姜黄素mPEG-PLGA纳米粒对香烟提取物刺激巨噬细胞RAW264.7所致激素抵抗现象逆转作用的研究  

The Effect of Curcumin Loaded mP EG-PLGA Nanoparticles on Reversing Corticosteroid Resistance Induced by Cigarette Smoke Extract in Macrophages RAW264.7

作　　者：王帝[1] 崔志磊[1] 郭雪君[1] 

机构地区：[1]上海交通大学医学院附属新华医院呼吸科,上海200092

出　　处：《中国呼吸与危重监护杂志》2016年第1期68-74,共7页Chinese Journal of Respiratory and Critical Care Medicine

基　　金：上海市科委科技创新行动计划重点项目(编号:14401970500)

摘　　要：目的制备以单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物(mPEG-PLGA)为载体的姜黄素纳米粒(CUR-NPs),探讨姜黄素(CUR)和CUR-NPs逆转香烟提取物(CSE)暴露所致的激素抵抗现象,比较CUR-NPs和CUR生物学作用的差异。方法采用乳化溶剂挥发法制备CUR-NPs,激光粒度测定仪和透射电子显微镜分别对CUR-NPs的粒径分布和形貌进行表征。脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞RAW264.7布地奈德(BUD)(10^(-10)~10^(-5)mol/L)干预。LPS+CSE刺激巨噬细胞RAW264.7,BUD(10^(-10)~10^(-5)mol/L)、CUR(10^(-10)~10^(-5)mol/L)、CUR(10^(-7)mol/L)+BUD(10^(-9)~10^(-5)mol/L)、CUR(10^(-9)~10^(-5)mol/L)+BUD(10^(-7)mol/L)、CUR-NPs(10^(-9)~10^(-5)mol/L)+BUD(10^(-7)mol/L)干预,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测巨噬细胞RAW264.7所分泌的IL-8。CES刺激巨噬细胞RAW264.7,BUD(10^(-7)mol/L)、CUR(10^(-7)、10^(-6)mol/L)和CUR-NPs(10^(-7)、10^(-6)mol/L)干预,实时定量PCR检测细胞中组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)mRNA的表达,蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中HDAC2蛋白的表达。共聚焦显微镜检测巨噬细胞RAW264.7对CUR和CUR-NPs内CUR的摄取量。结果 CUR-NPs外观呈圆形或类圆形,平均粒径为(356.4±146.6)nm。与LPS刺激相比,LPS+CSE共刺激时BUD(10^(-10)~10^(-5)mol/L)对IL-8分泌的最大抑制率显著降低(P<0.05),半数抑制浓度(IC50)显著增高(P<0.05)。LPS+CSE共刺激时,与BUD(10^(-10)~10^(-5)mol/L)组相比,CUR(10^(-7)mol/L)+BUD(10^(-9)-10^(-5)mol/L)组BUD对IL-8分泌的最大抑制率显著增高(P<0.05),IC50显著降低(P<0.05)。在LPS+CSE共刺激,CUR和CUR-NPs浓度梯度同为10^(-9)、10^(-8)和10^(-7)mol/L时,CUR-NPs+BUD(10^(-7)mol/L)组对IL-8分泌的抑制率显著高于CUR+BUD(10^(-7)mol/L)组(P<0.05)。CSE刺激后细胞中HDAC2的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05);与CSE组相比,CUR(10^(-7)、10^(-6)mol/L)组及CUR-NPs(10^(-7)、10^(-6)mol/L)组细胞中HDAC2的mRNA和蛋白表达量显著增高(P<0.05)。浓度梯度同为10^(-7)mol/L时,CUR-NPs组细胞中HDAC2的mRNA�Objective To prepare curcumin loaded monomethoxyl poly（ ethylene glycol ） -poly （ lactic-co-glycolicacid） （ mPEG-PLGA） nanopaticles （ CUR-NPs） , investigate the effect of curcumin （ CUR） and CUR-NPs on reversing corticosteroid resistance induced by cigarette smoke extract （ CSE） , and compare biological function between CUR and CUR-NPs in macrophages RAW264. 7.Methods mPEGPLGA nanoparticles loaded with CUR were prepared via emulsion solvent evaporation. In lipopolysaccharide （ LPS） stimulated macrophages RAW264. 7, budesonide （ BUD） was used to treat macrophages RAW264. 7. In LPS and CSE stimulated macrophages RAW264. 7, BUD （ 10^-10 -10^-5 mol /L） , CUR（ 10^-10 -10^-5 mol /L） , CUR（ 10^-7 mol /L） ＋ BUD（ 10^-9 - 10^-5 mol /L） , CUR（ 10^-9 -10^-5 mol /L） ＋BUD（ 10^-7 mol /L） , and CURNPs（ 10^-9 -10^-5 mol /L） ＋ BUD（ 10^-7 mol /L） were respectively used to treat macrophages RAW264. 7 activated. The level of IL-8 in cell culture supernatant was measured by ELISA. In CSE stimulated macrophages RAW264. 7, CUR（ 10^-7 and 10^-6 mol /L） and CUR-NPs（ 10^-7 and 10^-6 mol /L） were used to treat macrophages RAW264. 7. The mRNA level of HDAC2 was measured by real-time PCR, the protein level of HDAC2 was measured byWestern blot. Cellular uptake of CUR and CUR-NPs in macrophages RAW264. 7 was determined by cellular fluorescence intensity observed and detected by laser confocal microscopy imaging. Results The morphology of CUR-NPs was spherical and the mean particle size was （ 356. 4 ± 146. 6） nm. Compared with LPS stimulation, co-stimulation of LPS and CSE led to a significant decrease in the maximum inhibitory rate of BUD on IL-8 （ P 〈0. 05） and a significant increase in the 50% inhibitory concentration （ IC50） of BUD on IL-8 （ P 〈0. 05） . When using LPS ＋CSE to stimulate, compared with BUD （ 10^-10 -10^-5 mol /L） group, the maximum inhibitory rate of BUD in CUR （ 10^-7 mol /L） ＋ BUD （ 10^-9 - 10^-5 mol /L） grou

关 键 词：姜黄素 激素抵抗 纳米粒子 共聚物 

分 类 号：R56[医药卫生—呼吸系统]