人胰岛素原基因在大肠杆菌中的表达和纯化  

Expression and purification of human proinsulin gene in Escherichia coli

作　　者：张晓玮[1] 彭振英[1] 陈高[1] 郑玲[1] 于金慧 毕玉平[1,3] 边斐[1] 

机构地区：[1]山东省农业科学院生物技术研究中心,山东济南250100 [2]山东省农作物种质资源中心,山东济南250100 [3]山东省农业科学院研究生教育中心,山东济南250100

出　　处：《山东大学学报（理学版）》2015年第11期8-15,22,共9页Journal of Shandong University(Natural Science)

基　　金：国家国际科技合作专项资助项目(2012DFA30450);山东省自然科学基金资助项目(ZR2014CQ043);山东省农业科学院青年科研基金资助项目(2014QNZ05);山东大学微生物技术国家重点实验室开放课题资助项目(M2014-01)

摘　　要：将人胰岛素原基因序列(human proinsulin,PI)经密码子优化后与Trx A蛋白融合表达,构建原核表达载体Trx A-PI转入不同大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)、Trans B(DE3)和Rosetta-gami(DE3)中。SDS-PAGE显示融合蛋白在3种表达菌株中均有表达,在Rosetta-gami(DE3)中表达量最高,是普通大肠杆菌BL21(DE3)表达量的10倍。通过优化诱导温度等发酵条件,可溶性重组融合蛋白Trx A-PI在Rosetta-gami(DE3)菌株中表达量为3.5 g/L,比未优化时提高约10倍。Trx A-PI用肠激酶酶切后,利用His Trap FF柱分离纯化PI,经Western-blot检测重组PI具有免疫原性。The human proinsulin （PI） gene sequence was optimized using the Escherichia coli preferred codons. The reformed PI gene was amplified, the fused expression vector （TrxA-PI） was constructed and transformed into three E. coli expression strains BL21 （ DE3 ）, TransB （ DE3 ） and Rosetta-gami （ DE3 ）. SDS-PAGE analysis showed that the expression level of the fused protein was the highest in Rosetta-gami （ DE3 ） strain, which was about 10 times higher than in BL21（ DE3 ） strain. The production of soluble fused protein was 3.5 mg/mL after optimization of the fermentation conditions. The purified recombinant PI was obtained after enterokinase digestion and HisTrap FF column purification, and its antigen activity was measured using Western-blot analysis.

关 键 词：胰岛素原 密码子优化 大肠杆菌表达 

分 类 号：Q815[生物学—生物工程]