三种家禽病毒多重RT-LAMP检测方法的建立与应用  

作　　者：陈兵[1] 孙洁 陈书琨[1] 曾少灵 林庆燕[1] 刘建利 陶虹[1] 曹琛福 阮周曦 吕建强[1] 杨俊兴[1] 吴绍强[3] 卢体康[1] 秦智锋[1] 

机构地区：[1]深圳出入境检验检疫局,深圳518045 [2]深圳市检验检疫科学研究院,深圳518001 [3]中国检验检疫科学研究院,北京100176

出　　处：《上海畜牧兽医通讯》2016年第1期2-5,共4页Shanghai Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine

基　　金：科技部质检公益项目(201210018)资助

摘　　要：LAMP检测方法由于具有扩增速度快、现场检测的潜力而备受关注。但目前的研究多是聚焦于单重LAMP扩增,只能进行单个目标的检测。本研究首次将禽流感、新城疫和传染性法氏囊三种病毒性疾病作为一个检测整体,建立了对三种疫病同时进行筛选检测的多重RT-LAMP检测方法。本研究首先通过减少LAMP标准反应体系中的外引物来减少引物之间的相互干扰;其次以Calcein为核酸染料,建立了禽流感、新城疫和传染性法氏囊三种病毒实时荧光多重反转录环介导等温扩增(multiplex real-time reverse transcription-LAMP,mRT-LAMP)检测方法;三是对该法特异性、敏感性及准确性进行了评价。试验结果显示:所建立的mRT-LAMP检测方法可对AIV、NDV和IBDV同时进行筛选检测,灵敏度可达到10个基因拷贝,与单重LAMP检测的灵敏度相当;所建立的方法特异性强,与其他病原体无交叉反应;小规模田间试验显示该法可用于三种病毒的快速筛选检测,结果准确可靠。结果表明:本实验建立的mRT-LAMP检测法可满足三种家禽病毒的快速筛选检测需求,具有一定的应用价值。

关 键 词：多重检测 RT-LAMP检测 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]