油菜抗菌肽基因BnLTP1的克隆表达及活性  

Antimicrobial activity detection of antimicrobial peptide gene BnLTP1 from Brassica napus

作　　者：曹慧慧[1] 董彩华[1,2] 于景印[1] 柯涛[3] 童超波[1,2] 黄军艳[1,2] 刘胜毅[1,2] 

机构地区：[1]中国农业科学院油料作物研究所,农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,湖北武汉430062 [2]湖北大学,生物资源绿色转化湖北省协同创新中心,湖北武汉430062 [3]南阳师范学院生命科学与技术学院,河南南阳473061

出　　处：《中国油料作物学报》2016年第1期1-6,共6页Chinese Journal of Oil Crop Sciences

基　　金：公益性行业(农业)科研专项(201103016);国家973项目(2011CB109305);国家863计划(2013AA102602);国家自然科学基金(31471536,31301039);国家油菜产业技术体系(CARS-13-05);湖北农业科技创新中心

摘　　要：为研究转脂蛋白(lipid transfer protein,LTP)作为抗菌肽在油菜防御反应中的作用,利用生物信息学的方法,从油菜中筛选获得了一个转脂蛋白类抗菌肽基因,命名为Bn LTP1。Bn LTP1基因长度为93bp,编码31个氨基酸残基。抗菌肽Bn LTP1分子量约为3.4k Da,其序列中的4个半胱氨酸形成两个分子内二硫键,对于稳定抗菌肽的结构起到至关重要的作用。通过overlap PCR的方法对该基因进行体外人工合成,并克隆到p ET30a/His-EDDIEGFP表达载体上进行体外原核表达。抑菌活性实验检测发现,Bn LTP1对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和酵母菌都有较强的抑菌活性;对植物病原真菌(核盘菌、灰霉菌和稻瘟病菌)等也具有抑菌活性。Lipid transfer protein（ LTP） play an important role in plant defense. In this study,Bn LTP1 gene was cloned from Brassica napus L. It harbored 93 bp,encoding 31- amino acids with molecular weight of 3. 4 k Da.The gene was synthesized artificially by overlap polymerase chain reaction（ PCR） and cloned into the prokaryotic expression vector ET30 a / His- EDDIE- GFP. Its peptide Bn LTP1 was expressed in Escherichia coli BL21. Antimicrobial activity demonstrated that Bn LTP1 exhibited strong antimicrobial activity against Gram- positive bacteria,Gram- negative bacteria and yeast. Bn LTP1 also had strong antifungal activity against several plant pathogenic fungi,including Sclerotinia sclerotiorum,Magnaporthe oryzae and Botrytis cinerea.

关 键 词：油菜 抗菌肽 转脂蛋白 融合表达 活性检测 

分 类 号：S565.403[农业科学—作物学]