甘蔗黑穗病菌和赤腐病菌双重PCR检测体系的建立  

Establishment of Duplex PCR Detection System for Sporisorium scitamineum and Colletotrichum falcatum from Sugarcane

作　　者：吴伟怀[1,2] 杨先锋 梁艳琼[2] 汪全伟[3] 郑金龙[2] 郑肖兰[2] 习金根[2] 李锐[2] 张驰成 贺春萍[2] 易克贤[2] 

机构地区：[1]农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地-海南省热带作物栽培生理学重点实验室,农业部儋州热带作物科学观测实验站,海南儋州571737 [2]中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室,海南海口571101 [3]中国热带农业科学院科技信息研究所,海南海口571101

出　　处：《中国糖料》2016年第2期1-4,共4页Sugar Crops of China

基　　金：中国热带农业科学院橡胶研究所省部重点实验室/科学观测实验站开放课题(RRI-KLOF201506);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2012hzs1J012、2014hzs1J012、2015hzs1J014)

摘　　要：目前,针对甘蔗黑穗病菌与赤腐病菌单个病菌检测体系已相继建立,但是仍然未见两个病原菌的双重PCR检测方法。在本研究中,根据黑穗病菌交配型b E基因、甘蔗赤腐病菌特异性SCAR片段序列的特异性引物,在二者单一PCR检测体系的基础上,建立并优化可同时检测黑穗病菌和赤腐病菌的双重PCR检测方法。建立的双重PCR检测体系可从黑穗病菌与赤腐病菌样品中分别扩增出320 bp和442 bp的特异条带。灵敏度分析结果表明,对混合模板黑穗病菌与赤腐病菌的最低检测水平量均为0.1ng。At present, the polymerase chain reaction assay have developed for accurate and sensitive detection of smut（Sporisorium scitamineum） and red rot disease（Colletotrichum falcatum） in sugarcane respectively, but duplex PCR detection method of them still did not be established. In the present study, a polymerase chain reaction assay was developed for simultaneous detection of S. scitamineum and C. falcatum using the specific primer pair CLS 320F/R and SCAR F/R based on the b E region of S. scitamineum and the SCAR regions of C.falcatum respectively. The results showed that the 320 bp and 442 bp specific fragment was amplified only from S. scitamineum and C. falcatum, respectively. The detection sensitivity of S. scitamineum and C. falcatum was both 0.1 ng for genomic DNA.

关 键 词：甘蔗黑穗病菌 甘蔗赤腐病菌 双重PCR 检测体系 

分 类 号：S435.661[农业科学—农业昆虫与害虫防治]