柑橘叶点霉菌ISSR-PCR反应体系的优化  

Optimization of Inter-simple Sequence Repeat PCR Reaction System of Phyllosticta citricarpa

作　　者：王兴红[1] 李红叶[2] 

机构地区：[1]中国林业科学研究院华北林业实验中心,北京102300 [2]浙江大学农业与生物技术学院,浙江杭州310058

出　　处：《华北农学报》2016年第1期123-127,共5页Acta Agriculturae Boreali-Sinica

基　　金：国家现代农业(柑橘)产业技术体系建设专项资金(CARS-27)

摘　　要：为了获得最优柑橘黑斑病病原菌柑橘叶点霉菌ISSR-PCR反应体系,利用单因素试验法对反应体系中的5个因素(Mg2+、d NTP、引物、Taq DNA聚合酶和模板DNA)分别设置了不同的浓度梯度进行反应体系的优化。结果表明,在20μL反应体系中,含有1.5 mmol/L的Mg2+、0.15 mmol/L的d NTP、0.3μmol/L的引物、25 ng DNA模板、0.5 U Taq DNA聚合酶为最优。利用优化的ISSR-PCR反应体系对不同地理来源的21株柑橘叶点霉菌菌株进行扩增。结果表明,已建立的体系稳定可靠。柑橘叶点霉菌ISSR-PCR反应体系的建立为利用ISSR分子标记技术对柑橘叶点霉菌进行遗传分析奠定了基础。In order to obtain the optimization of ISSR-PCR reaction system of Phyllosticta citricarpa（ Mc Alpine） van der Aa,the concentrations of five factors（ Mg2 ＋,d NTP,primers,Taq DNA polymerase,template） were respectively optimized by single factor test. The result showed that the optimized reaction system consisted of 1. 5mmol / L Mg2 ＋,0. 15 mmol/L d NTP,0. 3 μmol/L primers,25 ng template DNA,0. 5 U Taq DNA polymerase. The optimized ISSR-PCR reaction system was stable and credible by the amplification of 21 strains of P. citricarpa. The study would provide the basis for the genetic analysis of P. citricarpa.

关 键 词：柑橘叶点霉菌 ISSR 单因素试验法 柑橘黑斑病 

分 类 号：S435.79[农业科学—农业昆虫与害虫防治]