SV40T抗原肝细胞特异性表达载体的构建与鉴定  

作　　者：谢永华 王冠明 许秀秀 

机构地区：[1]泉州医学高等专科学校,福建泉州362000

出　　处：《生物技术世界》2016年第5期28-30,共3页Biotech World

基　　金：泉州市科技计划重点项目(2013Z112)

摘　　要：目的构建在肝细胞中特异性表达SV40T抗原的表达载体并进行鉴定。方法通过Gateway技术构建SV40T慢病毒载体p LV-Puro-ALB>SV40T并通过菌落PCR筛选鉴定,将其与辅助质粒p LV-helper1、p LV-helpe2、p LV-helper3共转染293T细胞包装慢病毒并在荧光显微镜下进行滴度值测定。用SV40T慢病毒载体转染肝癌Hep G2细胞,并在荧光显微镜下行转染效率测定;实时荧光定量PCR检测转染细胞SV40T基因的表达水平。结果 Gateway技术构建的慢病毒载体p LV-Puro-ALB>SV40T经鉴定完全正确;慢病毒包装48 h后视野下可见清晰绿色荧光表达,病毒滴度为1.73×108 TU/m L。慢病毒载体成功转染Hep G2细胞,转染效率约70%,并通过RT-PCR检测SV40T表达水平明显升高。

关 键 词：肝细胞 SV40T 抗原 慢病毒 

分 类 号：Q2[生物学—细胞生物学]