猪skMLCK基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率测定  

作　　者：曾阳阳[1] 朱弘焱[1] 田玉民[1] 苏玉虹[1] 

机构地区：[1]辽宁医学院畜牧兽医学院,辽宁锦州121001

出　　处：《畜牧与兽医》2016年第2期70-73,共4页Animal Husbandry & Veterinary Medicine

基　　金：国家自然科学基金(31272415/C170102);辽宁医学院奥鸿博泽项目(AH2014007)

摘　　要：为了构建猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(sk MLCK)基因有效短发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体,筛选出最佳干扰效率的序列,采用RNAi技术,设计并合成3条siRNA干扰序列,插入到慢病毒穿梭质粒(h U6-CMV-puror-Ploy A)上,与慢病毒包装系统共转染293T细胞,收集病毒上清并进行病毒滴度的测定,将其转染小鼠C2C12细胞,分别用实时定量PCR和Western blot方法检测细胞中sk MLCK基因mRNA和蛋白的表达。结果显示:PCR扩增和测序分析结果显示靶向sk MLCK RNAi慢病毒载体构建成功;转染小鼠C2C12细胞后,sk MLCK基因mRNA和蛋白均受到不同程度抑制,实时定量PCR显示,抑制率分别为(29.2±4.43)%、(76.4±7.33)%、(20.0±1.8)%;Western blot显示,抑制率分别为(29.6±5)%、(42.4±1.6)%、(34.3±1.2)%。结论:成功构建猪sk MLCK基因有效shRNA的慢病毒载体,确定干扰载体-2(sk MLCKRNAi-2)具有最佳干扰效果,证实sk MLCK基因RNAi慢病毒载体能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为进一步研究该基因与肌肉肉质性状的关系奠定了基础。

关 键 词：skMLCK基因 RNA干扰 慢病毒载体 转染 

分 类 号：S852.6[农业科学—基础兽医学]