大豆茎秆蛋白质双向电泳技术体系优化  

Optimization of proteomic method of two-dimensional electrophoresis for soybean stem

作　　者：刘卫国[1] 邹俊林[1] 杨晨雨[1] 罗玲[1] 蒋涛[2] 杨文钰[1] 

机构地区：[1]四川农业大学生态农业研究所农业部西南作物生理生态与耕作重点实验室,四川成都611130 [2]西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041

出　　处：《中国油料作物学报》2016年第2期230-236,共7页Chinese Journal of Oil Crop Sciences

基　　金：国家自然科学基金(31201170;31071373);国家重点基础研究发展计划(973计划)(2011CB100402);四川省育种攻关项目

摘　　要：为建立一套完整、可行的适合大豆茎秆蛋白的双向电泳技术,对大豆茎秆蛋白的提取方法、双向电泳的固相化p H梯度凝胶(IPG)、上样量、SDS-PAGE胶浓度、染色方法等进行了优化。结果表明,将传统的TCA/丙酮法与酚法相结合,提取的大豆茎秆蛋白经双向电泳分离后,可获得较多的蛋白点,且背景清晰,便以识别。双向电泳优化后的主要技术参数为p H3-10非线性IPG胶条、上样量800μg、12%SDS-PAGE胶、考马斯亮蓝染色。本研究形成的大豆茎秆蛋白提取方法和双向电泳技术方案,有利于进一步采用蛋白质组学分析大豆茎秆的生物学功能。To optimize soybean stem protein extraction and separation method for better application of 2- D electrophoresis on soybean proteomics,extraction method,p H of IPG strips,sample loading quantity,SDS- PAGE gel concentration and staining method were compared. Results showed that the new protein extraction method combining TCA / acetone precipitation and phenol extraction could resolve more protein with better separation by 2- D electrophoresis. The optimized processes included p H3- 10 non- linear IPG strip and loading 800μg soybean stem protein for the first- dimensional IEF,12% polyacrylamide gel for the SDS- PAGE electrophoresis,and Coomassie brilliant blue staining.

关 键 词：大豆 茎秆 双向电泳 蛋白质组 

分 类 号：S565.1[农业科学—作物学]