人噬菌体抗体库的构建及人源性IL-17单链抗体的筛选  

作　　者：钮敏红[1] 闫晓霏 吕卫东[1] 万晓春[2] 

机构地区：[1]深圳大学第一附属医院深圳市第二人民医院,广东深圳518035 [2]中国科学院深圳先进技术研究院抗体药物研究中心,广东深圳518035

出　　处：《中国临床研究》2016年第5期687-690,共4页Chinese Journal of Clinical Research

基　　金：深圳市科技创新基础研究项目(深科技创新[2013]171号)

摘　　要：目的通过噬菌体展示技术构建人源单链抗体库,筛选抗IL-17的特异性抗体并鉴定。方法通过采集35位类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成c DNA,PCR扩增人H链和L链可变区抗体基因。利用SOE-PCR法将VH和VL片段拼接成Sc Fv片段并插入噬菌体载体p CANTAB5E中,构建人源噬菌体单链抗体库。通过固相化的抗原对抗体库进行3轮筛选后,挑取单克隆进行phage-ELISA鉴定,筛选与抗原具有较强结合性的噬菌体克隆。结果成功构建库容为3.5×10~8的噬菌体抗体库,从中筛选到5株阳性克隆,ELISA证实其对抗原IL-17具有较强的结合性及中和活性。结论成功构建了人源噬菌体单链抗体库,从中获得具有抗IL-17的人源Sc Fv抗体片段,为进一步的研究和应用提供实验基础。

关 键 词：白细胞介素-17 噬菌体展示抗体库 单链抗体 类风湿关节炎 

分 类 号：Q813[生物学—生物工程]