驱动蛋白分子Kif14细胞内中小体定位的研究  

Study on intracellular midbody localization of kinesin moter protein Kif14

作　　者：马新[1] 姜伟[1,2] 朱长军[2] 

机构地区：[1]中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院,北京100021 [2]天津师范大学生命科学学院,天津300387

出　　处：《天津师范大学学报（自然科学版）》2016年第3期54-58,共5页Journal of Tianjin Normal University：Natural Science Edition

基　　金：国家自然科学基金面上资助项目(31271485);2011年教育部"新世纪优秀人才支持计划"资助项目(NCET-11-1066);天津市应用基础与前沿技术研究计划一般资助项目(14JCYBJC24200);天津市科技型中小企业技术创新资金资助项目(14ZXCXSY00121)

摘　　要：为了探讨决定人体驱动蛋白分子Kif14在细胞有丝分裂末期时定位于细胞中小体的功能域,构建了驱动蛋白分子Kif14各功能域的绿色荧光蛋白(GFP)真核细胞表达质粒,分别转染于人体子宫颈癌细胞He La中.应用聚丙烯酰氨凝胶电泳和免疫印迹法(Western Blot)检测各蛋白的表达情况;应用免疫荧光染色法(immunofluorescence)分别对微管蛋白(Tubulin)、着丝粒相关蛋白(CREST)和DNA染色,荧光显微镜下观察各绿色荧光融合蛋白在有丝分裂末期的亚细胞定位.结果发现,细胞有丝分裂末期,驱动蛋白分子Kif14的N末端GFP融合蛋白定位于中小体(midbody),马达区GFP融合蛋白沿微管分布,杆状尾区GFP融合蛋白以点状分布于细胞质,尾区GFP融合蛋白分布于整个细胞中.由此认为,Kif14驱动蛋白分子的N末端延伸区决定该蛋白分子在细胞有丝分裂末期定位于中小体.To study the domain of Kifl4 that determines its midbody localization in telophase in eukaryotic cells, the green fluorescent protein （GFP） expression plasmids for different Kifl4 domains were constructed and transfected into HeLa cells respectively. The expression of GFP-fused proteins were detected by Western Blot and the localization of these proteins was detected by immunofluorescence staining. The results showed that the GFP-fused N-terminal extension domain of Kifl4 locates in midbody in telophase, GFP-fused motor domain distributes along the microtubule, GFP-fused stock and tail domain appears dots distribution in cytoplasm, and GFP-fused tail region distributes throughout the cell. In conclusion, N-terminal extension of Kil14 determines its localization in midbody in telophase.

关 键 词：驱动蛋白 Kif14 有丝分裂末期 中小体 

分 类 号：Q966[生物学—昆虫学]