脓毒症大鼠肝细胞线粒体功能损伤机制的研究  

Study on functional damage mechanism of the hepatocellular mitochondria in the rats with sepsis

作　　者：李坤[1] 王锦权[1] 陶晓根[1] 张霖[1] 刘海华[1] 姚秀英[1] 张兴荣[1] 韦丽 黄业华[2] 

机构地区：[1]安徽医科大学附属安徽省立医院(南区)重症医学科,合肥230001 [2]安徽医科大学附属安徽省立医院(南区)肾内科,合肥230001 [3]WC1E6BT伦敦,UCLSchoolofPharmacy,UniversityCollegeLondon

出　　处：《中华实验外科杂志》2016年第5期1222-1225,共4页Chinese Journal of Experimental Surgery

基　　金：安徽省国际合作项目（1403062022）

摘　　要：目的 观察脓毒症大鼠肝细胞线粒体内膜水通道蛋白8（AQP8）表达对肝细胞及线粒体功能的影响.方法 将SD大鼠24只分为正常对照组（C组）、脓毒症组（S组）,每组12只.采用盲肠结扎穿孔（CLP）法建立大鼠脓毒症模型.制模18h后处死大鼠,取血检测丙氨酸氨基转移酶（A LT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）和天冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶（m-AST）水平,测定肝细胞三磷酸腺苷（ATP）含量,线粒体膜Na＋-K＋-ATP酶、Mg2＋-ATP酶、Ca2＋-ATP酶、Ca2＋ Mg2＋-ATP酶活性和线粒体膜电位水平,采用Western blot法和实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）法检测AQP8蛋白和mRNA的表达量.结果 与C组比较,S组血清ALT[（233.02±110.16） U/L]、AST[（742.56 ±441.41） U/L]和m-AST[（412.78 ±252.56） U/L]明显升高[C组对应值为（29.81±13.16）、（99.78±41.67）和（46.23±24.24） U/L,P＜ 0.01],肝细胞ATP含量[（19.27±8.76） nmoL/mg]明显减少[C组（94.65±17.79） nmol/mg,P＜0.01],线粒体Na＋-K＋-ATP酶[（2.81±0.81） U/mg蛋白]、Mg2＋-ATP酶[（2.59±1.03） U/mg蛋白]、Ca2-ATP酶[（1.63±1.26） U/mg蛋白]、Ca2＋-Mg2＋-ATP酶[（2.54±0.97） U/mg蛋白]活性和线粒体膜电位（1.73±1.06）水平明显下降[C组对应值为（4.74±0.84）、（4.49±0.73）、（3.48±0.43）、（4.68±0.81） U/mg蛋白和7.65±3.54,P＜0.01）],AQP8蛋白表达量（0.68±0.03）和AQP8 mRNA（0.34±0.19）转录量减少（C组对应值分别为1.24±0.05和1.00,P＜0.01）.结论 脓毒症时肝线粒体膜AQP8表达量减少、离子通道功能障碍,导致线粒体膜电位水平明显下降,肝组织ATP含量减少,最终导致肝细胞急性损伤.Objective To study the effect on the expression of the aquaporin 8 （AQP8） in inner mitochondrial membrane of the liver cells in the rats with sepsis,and on the function of the liver cells and mitochondria.Methods 24 SD rats were divided into the control group and the septic group with 12 rats respectively.The sepsis model of the rats was established by the cecal ligation and puncture.After 18 h of moulding,killing the rats and taking the blood,the alanime aminotransferase （ALT）,aspartate aminotransferase （AST） and mitochondrial aspartate aminotransferase （m-AST） were detected.The content of Adenosine Triphosphate （ATP） in the liver cells,mitochondrial membrane potential levels,and the activity of the mitochondrial membrane Na ＋-K ＋-ATPase,Mg2 ＋-ATPase,Ca2 ＋-ATPase and Ca2 ＋-Mg2 ＋-ATPase were tested.The expression quantity of AQP8 and AQP8 mRNA were measured with Western blotting and Real-time quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）.Results Compared with the control group,the serum ALT,AST and m-AST was higher that in the septic group and the content of ATP in the liver cells was lower significantly [（233.02 ± 110.16） U/L vs.（29.81 ± 13.16） U/L,（742.56 ± 441.41） U/L vs.（99.78 ±41.67） U/L,（412.78 ±252.56） U/L vs.（46.23 ±24.24） U/L,（19.27 ± 8.76） nmol/mg vs.（94.65 ± 17.79） nmol/mg,P 〈0.01）,the activity of the ATPases of the mitochondria and the mitochondrial membrane potential level was decreased significantly [（2.81 ± 0.81） U/mgprot vs.（4.74 ±0.84） U/mgprot,（2.59 ±± 1.03） U/mgprot vs.（4.49 ±±0.73） U/mgprot,（1.63 ± 1.26） U/mgprot vs.（3.48 ±±0.43） U/mgprot,（2.54 ±±0.97） U/mgprot vs.（4.68 ± 0.81） U/mgprot,1.73 ±± 1.06 vs 7.65 ±3.54,P 〈0.01],the expression quantity of AQP8 and the transcription quantity of AQP8 mRNA were reduced （0.68 ± 0.03 vs.1.24 ± 0.05,0.34 ±± 0.19 vs.1.00,P 〈 0.01）.Conclusion The reduction of the expression quantity of AQP8 in hepatocellular mito

关 键 词：脓毒症 肝脏 线粒体 水通道蛋白8 

分 类 号：R459.7[医药卫生—急诊医学]