云南省恶性疟原虫Pfcrt基因exon2区72～76编码序列多态性的分析  

Polymorphism of 72-76 Coding Sequence within Exon 2 Region of Pfcrt in Yunnan Province

作　　者：朱垚吉[1] 陈梦妮[2] 徐艳春[2] 毛祥华[2] 邓艳[2] 董莹[2] 

机构地区：[1]北京大学公共卫生学院,北京100191 [2]云南省寄生虫病防治所、云南省疟疾研究中心、云南省虫媒传染病防控研究重点实验室,普洱665000

出　　处：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》2016年第3期227-232,234,共7页Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases

基　　金：上海市2015年度“科技创新行动计划”国内合作项目(No.15495800400)~~

摘　　要：目的 分析云南省恶性疟病例中恶性疟原虫氯喹抗性转运蛋白（Plasmodium falciparum chloroquine resistant transporter, Pfcrt）基因exon2区72～76 编码（简称72～76编码）序列的多态性，为了解云南省抗氯喹恶性疟的流行现状提供依据。 方法 2012年8月至2015年9月，从云南省除迪庆、文山、昭通以外的13个州（市）收集恶性疟病例的滤纸血样和相关信息，通过流行病学调查判定感染来源地，根据中国疾病预防控制中心传染病报告信息管理系统疫情登记确认病例发现地。用巢式PCR扩增患者血样中的恶性疟原虫Pfcrt基因exon2区并测序，用MEGA 5.04分析72～76编码序列的多态性，计算变异位点、序列间遗传距离等。用IBM SPSS Statistics 21软件对分类变量72～76编码多态在各人群中的构成比进行分析。 结果 从2012年8月至2015年9月，共收集恶性疟病例血样232份，病例感染来源地有云南、非洲、缅甸等流行区。其中210份血样巢式PCR扩增阳性，序列分析显示，72～76编码序列存在CVMNK氯喹敏感型和CVIET、SVMNT、CVMNT氯喹抗性型，所占比例分别为15.2%（32/210）、76.2%（160/210）、6.7%（14/210）和1.9%（4/210）。氯喹敏感性型CVMNK在19～55岁、农民、感染地为东南亚（缅甸161例、柬埔寨1例）等病例中检出的比例分别为100%（32/32）、46.9%（15/32）和59.4%（19/32），高于同组其它病例的0、31.3%（10/32）和37.5%（12/32）（χ^2=13.674，8.478，6.292，P〈0.05）； 氯喹抗性型CVIET、SVMNT在感染地为缅甸和柬埔寨的病例中的比例分别为81.3%（130/160）和78.6%（11/14），高于云南感染病例的6.3%（10/160）和21.4%（3/14）（χ^2=6.519，6.620，P〈0.05）；非洲感染病例中的CVIET比例为12.5%（20/160），未检测到SVMNT型。210条Pfcrt基因exon2区DNA序列的同源位点为145 bp，保守位点占95.2%（138/145），变异位点占4.8%（7/145），序列间遗传距离为Objective To understand the endemic situation of chloroquine-resistant falciparum malaria in Yunnan Province by analyzing the polymorphism of the 72-76 amino-acid coding sequence within exon 2 region of Plasmodium falciparum chloroquine resistant transporter（Pfcrt） gene （referred to as the 72-76 coding region） in malaria patients. Methods The filter paper blood samples and relative information of falciparum malaria cases were collected in 13 prefectures of Yunnan Province （excluding Diqing, Wenshan, Zhaotong prefectures） from August 2012 to September 2015. The source of infection was determined by epidemiological investigation and the place of case discovery was confirmed according to the endemic registration in the Infectious Diseases Reporting Manage System, Chinese Center for Disease Control and Prevention. The exon2 region of Pfcrt gene was amplified by nested PCR and sequenced. The polymorphism of the 72-76 coding region was analyzed with MEGA 5.04. The variable sites and genetic distance between sequences were calculated. The constituent ratio of the polymorphism in sub-populations was analyzed with IBM SPSS Statistics 21 software. Results Two hundred and thirty-two blood samples were collected in the period and source of infection included Yunnan of China, Africa and Myanma. Nested-PCR resulted in positive products in 210 samples. Sequence analysis showed the presence of chloroquine-sensitive genotype（CVMNK）（15.2%, 32/210） and mutated chloroquine-resistant genotype（CVIET, SVMNT and CVMNT）（76.2%, 160/210; 6.7%, 14/210; 1.9%, 4/210） 72-76 coding regions. The proportion of the CVMNK type was 100%（32/32） in cases with the range of 19-55 years, 46.9% （15/32） in farmers, and 59.4% （19/32） in patients with infection source in Southeast Asia, all significantly higher than those of other cases in the same groups（0; 31.3%, 10/32; and 37.5%, 12/32 respectively, χ^2=13.674, 8.478, 6.292, P〈0.05）. The proportion of the CVIET and SVMNT genotypes in patients with infection s

关 键 词：恶性疟原虫 氯喹抗性 基因型 多态 分析 

分 类 号：R382.312[医药卫生—医学寄生虫学]