促红细胞生成素缓释明胶水凝胶微球治疗小鼠下肢缺血的效果及机制  

Therapeutic effects and related mechanisms of erythropoietin sustained-release gelatin hydrogel microspheres on a murine model of hindlimb ischemia

作　　者：肖锦雯 李龙虎[2] 洪炳哲[2] 肖健齐[3] 魏冬梅[3] 金哲[1] 

机构地区：[1]大连大学附属中山医院心内科,116001 [2]黑龙江省齐齐哈尔市第一医院心内科 [3]黑龙江省齐齐哈尔市第一医院科教部

出　　处：《中华心血管病杂志》2016年第6期524-529,共6页Chinese Journal of Cardiology

基　　金：国家教育部留学回国人员科研启动基金[教外司留（2013）693号]

摘　　要：目的探讨促红细胞生成素缓释明胶水凝胶微球（EPO—GHM）治疗小鼠下肢缺血的效果及其机制。方法将52只雄性10周龄C57BIM6J小鼠分为5组：假手术组（8只小鼠，仅穿线而不结扎右后肢股动脉）；盐水组（12只小鼠，结扎右后肢股动脉后，在右后肢一次性肌肉注射生理盐水4ml／kg）；EPO组（12只小鼠，结扎右后肢股动脉后，在右后肢一次性肌肉注射促红细胞生成素50001U／kg）；空GHM组[8只小鼠，结扎右后肢股动脉后，在有后肢一次性肌肉注射生理盐水浸泡过的明胶水凝胶微球（4ml／kg）]；EPO—GHM组（12只小鼠，结扎右后肢股动脉后，在右后肢一次性肌肉注射EPO—GHM5000IU／kg）。手术后应用激光多普勒血流成像仪对小鼠后肢的血流灌注进行连续监测。术后8周，采用免疫组织化学法检测各组小鼠右后肢的毛细血管密度（即CD31阳性毛细血管密度）、小动脉密度（即α平滑肌激动蛋白阳性小动脉密度）和肌肉面积[即肌动蛋白（HHF35）阳性肌肉面积]；采用双重免疫荧光标记法检测血管增殖指数，评价EPO—GHM对缺血肢体血管新生的影响；采用Western blot法检测右后肢肌肉中促红细胞生成素受体、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、磷酸化eNOS（p-eNOS）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达水平。结果（1）术后8周，EPO—GHM组缺血后肢与非缺血后肢的血流灌注比均高于盐水组、EPO组和空GHM组（0．810±0．080比0．563±0．051、0．570±0．056和0．561±0．052，P均〈0．05）。（2）EPO—GHM组CD31阳性毛细血管密度和α平滑肌肌动蛋白阳性小动脉密度均高于其他组（P〈0．01或0．05）。（3）盐水组、EPO组、空GHM组和EPO—GHM组的HHF35阳性肌肉面积均小于假手术组（P均〈0．05），盐水组、EPO组、空GHM组和EPO—GHM组之间的HHF35阳性肌肉面积差异均无统计学意�Objective To investigate the therapeutic effects of erythropoietin sustained-release gelatin hydrogel microspheres （EPO-GHM） on a murine model of hindlimb ischemia and related mechanisms. Methods Fifty two ten weeks old male C57BL/6J mice were assigned to 5 groups：shamoperated group （the fight femoral artery suture was passed through the right femoral artery but not tied, n = 8 ） ; saline group （ right femoral artery ligation and intramuscular injection of saline at a dose of 4 ml/kg into the right hind limb, n = 12 ） ; EPO group（ right femoral artery ligation and intramuscular injection of EPO at a dose of 5 000 IU/kg into the right hind limb, n ： 12） , empty GHM group （fight femoral artery ligation and intramuscular injection of empty GHM at a dose of 4 ml/kg into the right hind limb, n = 8 ） ; EPO-GHM group（ right femoral artery ligation and intramuscular injection of EPO-GHM at a dose of 5 000 IU/kg into the right hind limb, n = 12）. The blood flow ratio of ischemic limb （right）/nonischemic limb （left） was measured using a laser Doppler perfusion imager. After 8 weeks, immunohistochemical analysis were used to evaluate the vessel density （vessel density of CD31 positive）, arteriole density （vessel density of a-smooth muscle actin（ct-SMA） positive） and muscle area（HHF35 positive area）. The proliferating index of vessels was evaluated by double immunofluorescent labeling to evaluate effect of EPO-GHM on angiogenesis of ischemia limb. Western blot was used to evaluate the protein expression of EPO receptor, protein kinase B （AKT）, p-AKT, endothelial nitric oxide synthase （eNOS）, p-eNOS and matrix metalloproteinase 2 （MMP-2）. Results （ 1 ） Eight weeks later, the blood flow ratio of ischemic limb/nonischemic limb was significantly higher in the EPO-GHM group compared with other groups（0. 810 ±0. 080,0. 563 ±0. 051, 0. 570 ±0. 056 and 0. 561 ± 0. 052 respectively, all P 〈 0. 05）. （2） CD31 antibody positive and α-SAM antibody positive

关 键 词：缺血 下肢 红细胞生成素 

分 类 号：R543[医药卫生—心血管疾病]