人源性抗前列腺特异性膜抗原单链抗体的表达及活性鉴定  

作　　者：韩东晖[1] 吴介恒[2] 欧阳清[2] 魏铭[1] 席文锦[2] 杨安钢[2] 温伟红[2] 秦卫军[1] 

机构地区：[1]第四军医大学西京医院泌尿外科,陕西西安710032 [2]第四军医大学基础部免疫学教研室,陕西西安710032

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2016年第8期1120-1123,共4页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973)(2013CB530500);国家自然科学基金(81172146)

摘　　要：目的构建人源性抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体(sc Fv)的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化后,对其生物学活性进行鉴定。方法将人源性抗PSMA sc Fv的基因克隆入原核表达载体p ET302,将其转化入大肠杆菌BL21后用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,摸索不同诱导条件使sc Fv呈可溶性表达,经SDS-PAGE和Western blot法确认表达后,利用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白。利用流式细胞术检测sc Fv与PSMA阳性和阴性细胞的结合情况。结果成功构建人源性抗PSMA sc Fv的原核表达载体;在30℃、IPTG终浓度为0.05 mmol/L时,可实现目的蛋白的可溶性表达;经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后获得纯度较高的抗PSMA sc Fv蛋白;流式细胞术结果显示该sc Fv可与PSMA阳性的LNCa P前列腺癌细胞特异性结合,而不与PSMA阴性的PC-3细胞结合。结论在大肠杆菌成功表达了可溶性人源性抗PSMA sc Fv,获得的抗PSMA sc Fv能够特异性地与PSMA阳性前列腺癌细胞结合。

关 键 词：前列腺特异性膜抗原(PSMA) 单链抗体 原核表达 前列腺癌 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]