流感病毒NP蛋白与宿主蛋白CAP1相互作用的研究  

Identification of interaction between influenza virus NP protein and host CAP1 protein

作　　者：姜水涛 赵玉辉[1] 周圆[1] 罗维玉[1,2] 张杰[1] 李呈军[1] 陈化兰[1] 姜丽[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001 [2]甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070

出　　处：《中国预防兽医学报》2016年第7期513-517,共5页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：国家自然科学基金(31521005;31402206)

摘　　要：流感病毒核衣壳蛋白(NP)是病毒核糖核蛋白复合体(v RNP)的主要组成部分,主要调控病毒基因组的转录和复制。为筛选与流感病毒NP相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交技术(Y2H)在A549细胞c DNA文库中筛选到与其相互作用的宿主蛋白Adenylate cyclase-associated protein 1(CAP1),并通过酵母回交验证、免疫共沉淀技术(Co-IP)和GST pull down试验进一步证实NP与CAP1之间存在特异性的直接相互作用。此外,利用激光共聚焦试验证实NP与CAP1共定位于A549细胞的细胞质内。在HEK293T细胞中过表达CAP1蛋白后,流感病毒的复制能力下降,表明CAP1对流感病毒复制具有抑制作用。本研究对该蛋白的鉴定为流感病毒的复制机理研究奠定了基础。Nucleoprotein （NP） of influenza virus is a major component of viral ribonucleoprotein （vRNP） complex, which functions for the transcription and replication of viral genome. To identify host proteins interacting with influenza virus NP, the adenylate cyclase-associated protein 1 （CAP1） was scanned from A549 cell cDNA library by yeast two-hybrid （Y2H） screening, and further validated the interaction with NP by yeast retest, co-immunoprecipitation （Co-IP） and GST pull down assay. In addation, confocal laser assay showed NP and CAP1 were colocalized in the cytoplasm of A549 cell. Moreover, influenza virus replication was inhibited in CAPI overexpressed HEK293T cells. The identification of CAP1 laid the foundation for further studies of the replication mechanism of the virus.

关 键 词：酵母双杂交 NP蛋白 CAP1蛋白 相互作用 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]