人参总皂苷多克隆抗体的制备和鉴定  

作　　者：顾玲[1] 欧阳柳凤 陈飞燕[1] 江玉翠 陈翠花[1] 徐雁[1] 赵玉男[1] 

机构地区：[1]南京中医药大学基础医学院实验研究中心,江苏南京210023

出　　处：《时珍国医国药》2016年第8期1793-1795,共3页Lishizhen Medicine and Materia Medica Research

基　　金：国家自然科学基金(No.81303246);江苏省"青蓝计划"优秀骨干教师和江苏省中西医结合优势学科资助项目

摘　　要：目的进行人参总皂苷(ginseng total saponins,GTS)多克隆抗体的制备,并用不同方法进行验证。方法首先在D101大孔吸附树脂纯化的基础上,采用阴阳离子交换树脂的方法进行人参皂苷高纯提取物的制备,香草醛-硫酸比色法估测人参总皂苷的含量;然后通过过碘酸钠法构建人参总皂苷和牛血清白蛋白(BSA)的偶联物作为抗原制备得到人参总皂苷多抗;使用Protein A/G琼脂糖纯化和抗原柱双纯化抗体;最后用免疫细胞化学和生物膜层干涉(biological membrane layer interference,BLI)技术验证抗体。结果得到高纯度的人参总皂苷;SDS-PAGE表明抗原GTS-BSA偶联物制备成功;ELISA法检测受试组效价为(29.52±4.31),亲和树脂纯化后得到较纯多抗;生物膜层干涉技术表明人参总皂苷多抗与人参总皂苷、人参皂苷Re、Rg1、Rh1、Rh2、原人参二醇、F1、化合物K、原人参三醇的亲和力分别为3.99×10^(-7)、4.69×10^(-9)、2.59×10^(-9)、2.40×10^(-6)、1.62×10^(-4)、2.64×10^(-7)、1.66×10^(-10)、1.08×10^(-7)和1.32×10^(-6);免疫细胞化学(ICC)从细胞学水平上验证了抗体的有效性。结论人参总皂苷多抗的效价和特异性较高,可为下一步研究人参总皂苷在脑中的分布做好铺垫。

关 键 词：人参总皂苷 人参总皂苷多抗 酶联免疫吸附测定试验 生物膜层干涉技术 免疫细胞化学 

分 类 号：R284[医药卫生—中药学]